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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

[求助] native-page活性染色 已有3人参与

最近在做native-page活性染色,蛋白为木聚糖酶,理论上染色脱色后目的条带处应为无色且为单一条带,胶的其余部分应为红色。但是我做出来的结果是从点样孔到胶的三分之一处是无色的,而不是一条单一的条带,感觉目的蛋白是边跑边反应。(跑胶时是在冰浴中进行的)请问有没有这种边跑边反应的可能性啊?如何避免这种情况?
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

你的猜测和将要进行的处理方式都是正确的,就那样做吧。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-01-05 18:40:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
7楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2014-01-06 21:00:14
试过了,还是跑不下来...

把你所有操作、试剂配方、结果都发上来,要多图,起码1千字。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2014-01-06 21:47:18
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

原因很明显,就是在浸泡的时候酶把底物降解了,理论上来说,酶在跑过的地方是不会停留的,实际上是会有很少很少的酶是停留了的,在电泳结束后,保温的时候就会也参与降解底物。而且,酶在电泳过程中是会发挥一点点降解底物的能力的。我认为就是这两个原因造成你的降解区有点拖,下次所有条件不变,将酶再次稀释吧,就不止是100倍这么简单了,250、1000、2500和1000倍,这四个可能1000倍的会出现很锋利的单条降解带。而且,我觉得刚果红里面有没有必要加乙醇,我没加,也是能做得出来的。我不能给你看图片,因为我只不过是做过一次,而且那不是我学位论文的内容。
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13楼2014-01-07 22:42:08
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