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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » native-page活性染色
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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

[求助] native-page活性染色 已有3人参与

最近在做native-page活性染色，蛋白为木聚糖酶，理论上染色脱色后目的条带处应为无色且为单一条带，胶的其余部分应为红色。但是我做出来的结果是从点样孔到胶的三分之一处是无色的，而不是一条单一的条带，感觉目的蛋白是边跑边反应。（跑胶时是在冰浴中进行的）请问有没有这种边跑边反应的可能性啊？如何避免这种情况？
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严以律已，宽以待人
1楼 2013-12-29 22:19:26
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

你的猜测和将要进行的处理方式都是正确的，就那样做吧。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-01-05 18:40:56
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
7楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2014-01-06 21:00:14
试过了，还是跑不下来...

把你所有操作、试剂配方、结果都发上来，要多图，起码1千字。
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8楼2014-01-06 21:47:18
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

原因很明显，就是在浸泡的时候酶把底物降解了，理论上来说，酶在跑过的地方是不会停留的，实际上是会有很少很少的酶是停留了的，在电泳结束后，保温的时候就会也参与降解底物。而且，酶在电泳过程中是会发挥一点点降解底物的能力的。我认为就是这两个原因造成你的降解区有点拖，下次所有条件不变，将酶再次稀释吧，就不止是100倍这么简单了，250、1000、2500和1000倍，这四个可能1000倍的会出现很锋利的单条降解带。而且，我觉得刚果红里面有没有必要加乙醇，我没加，也是能做得出来的。我不能给你看图片，因为我只不过是做过一次，而且那不是我学位论文的内容。
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13楼2014-01-07 22:42:08
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