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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白质银染问题求助
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 蛋白质银染问题求助 已有2人参与

固定后，醇洗、水洗、硫代硫酸钠敏化、水洗、硝酸银染、水洗、甲醛-碳酸钠溶液显色、乙酸终止。
最左边是marker，灰色泳道没有加样。
背景色深，中间蛋白质样品（蛋白质成分相对单一）没有明显的条带，有亮带和暗带。染色需怎样改进？亮带和暗带是怎么回事？不知道怎么看银染的结果
蛋白质银染问题求助
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1楼 2013-12-27 14:36:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jurkat.1640: 金币+1, ★有帮助 2013-12-27 15:51:03
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 新年快乐。 2013-12-27 17:06:32
jurkat.1640: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-28 16:28:52
jurkat.1640: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-14 09:51:10
蛋白上样量是否合适？水洗时间不要太长了，15"洗三次。除了固定液和乙醇以外，溶液要当天新鲜配制。
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2楼2013-12-27 15:10:02
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-27 15:10:02
蛋白上样量是否合适？水洗时间不要太长了，15"洗三次。除了固定液和乙醇以外，溶液要当天新鲜配制。

洗的时间不长，第一次做所以都是新配的。
为什么上面的带是白色（貌似蛋白比较多），下面的是黑色带？
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3楼2013-12-27 15:50:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2013-12-27 15:50:34
洗的时间不长，第一次做所以都是新配的。
为什么上面的带是白色（貌似蛋白比较多），下面的是黑色带？...

你指什么带白色黑色？还有忘记问你右边的泳道是什么样品？
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4楼2013-12-27 16:19:03
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-27 16:19:03
你指什么带白色黑色？还有忘记问你右边的泳道是什么样品？...

最右边是IP后的磁珠变性后溶液。大分子量部分有亮带。
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5楼2013-12-28 11:15:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-28 20:59:53
引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2013-12-28 11:15:28
最右边是IP后的磁珠变性后溶液。大分子量部分有亮带。...

我觉得是硝酸银的问题，通常情况下不会是这种亮色，应该是棕色和暗棕色。有些疏水蛋白是黑色的。最左边的marker染色还算是可以的。如果背景深可能是水不干净，要用mili-Q水配置各种溶液，染胶的容器也要干净。
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6楼2013-12-28 13:23:23
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-28 13:23:23
我觉得是硝酸银的问题，通常情况下不会是这种亮色，应该是棕色和暗棕色。有些疏水蛋白是黑色的。最左边的marker染色还算是可以的。如果背景深可能是水不干净，要用mili-Q水配置各种溶液，染胶的容器也要干净。...

marker本来就有颜色
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7楼2013-12-28 16:29:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
kx444555: 金币+2 2014-02-11 15:17:55
kx444555: 鼓励交流 2014-02-11 15:18:05
引用回帖:
7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2013-12-28 16:29:52
marker本来就有颜色...

预染的marker的染料通常是考马斯亮蓝之类的，在固定时会退去不少。一般银染后会变成棕色。
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8楼2013-12-29 02:29:40
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wangdunzju

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-11 15:18:13
jurkat.1640: 金币+2, ★有帮助 2014-04-14 09:50:55
我觉得也是上样量的问题，mark上样量减少一倍再，样品没有带的样要增加上样浓度。
另外，碳酸钠如果失效，效果也不好
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9楼2014-02-11 11:39:01
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