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dgm1208

银虫 (小有名气)

[求助] 链霉菌基因组DNA的大提

我有几株链霉菌想要提取基因组DNA后做杂交,大提DNA的方法是改良的CTAB法,最后虽然提取的量比较少,但是能用玻璃棒搅丝,之后用70%的乙醇洗盐,再之后风干(风干彻底),再之后用0.1xSSC溶解,却溶解不了,SSC是最新配制的,而且第一次提取的时候出现不溶解的情况,又重新配制了ssc···第二次还是不溶解。求大神指导。
或者哪位大神之前大提过链霉菌的DNA,求方法啊,我已经提了一个多月了,真心已经黔驴技穷了···
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科研路艰辛···
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bikexmx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
dgm1208: 金币+100, ★有帮助, 10 2013-12-25 21:09:23
跑电泳没有条带吗?个人认为可能是样品里还存有蛋白质等杂质,可以再用氯仿-异戊醇抽提一下,楼主用的是什么方法提的,我们实验室一般用CTAB法,可以让溶菌酶和蛋白酶多反应一会,去除多余杂质,希望对你有帮助
前方总有更多挑战,战胜恐惧,勇往向前,加油~~~~
7楼2013-12-24 09:17:12
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查看全部 16 个回答

开云者

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+4, good! 2013-12-23 21:38:05
dgm1208: 金币+30, ★★★很有帮助, 谢谢你哈,之前由于操作失误把之前的100金币都给了bikexmx,又追加的,金币不多,谢谢你 2013-12-26 18:19:51
方法一:如果这种菌能长成菌落 ,你就用宝生物的这个试剂盒来提一下(Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR),这个很便宜。
方法二:如果这个试剂盒不可以的话,你就用德国QIAGEN的试剂盒,这个大约1500,有点贵。
这些应该没有问题,你试试吧。
希望能帮到你
挥霍不起青春
2楼2013-12-23 21:13:54
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taoway

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
总DNA??能过分挥干,乙醇脱?????甩下液体,用移液器???掉液体,敞???放置几分钟至闻??到乙醇味???就???以加水或buffer溶解。然???置于55度水浴个10分钟就???以了。??好??

[ ????С??????? ]
3楼2013-12-23 22:04:00
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taoway

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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dgm1208: 金币+70, ★★★★★最佳答案, 谢谢你哈,之前由于操作失误把之前的100金币都给了bikexmx,又追加的,金币不多,谢谢你 2013-12-26 18:19:04
不好意思,刚才在路上用手机回复的,发现全是乱码。
我感觉你的问题出在DNA风干,我们实验室提取链霉菌总DNA后,用75%乙醇脱盐两次,然后稍稍spin一下用移液枪吸掉液体,敞口在超净台或工作台面放置几分钟至闻不到乙醇味道,随后加水或TE溶解DNA。混匀一下在55度水浴锅内放置5-10分钟促溶一下就可以了。注意一定不要将总DNA完全风干!祝好运!
4楼2013-12-23 22:36:06
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