| 查看: 882 | 回复: 2 | |||
[求助]
包涵体蛋白纯化 已有1人参与
|
|
我的蛋白性质： 105kDa ,pet17b载体，在N末端有三个大的疏水区，C端有一个连窜的的9肽重复序列，富含gly和asp。 我处理的过程： 1. 400ml的菌液离心后用30ml pH=7.8,0.5 M NaCl，20 mM 磷酸盐，在用压力破碎。 2. 离心取上清，4℃与树脂杂交1小时。 3. 将树脂和样品加入到柱子中，让树脂自然沉淀，并将流出液再次上样。 4. 上样完后PH梯度洗脱。依次用binding buffer（ pH7.8 8 M Urea ，20mM Sodium Phosphate ，500 mMNaCl）、pH=7.0 washing buffer (8M Urea 20mM Sodium Phosphate, 500 mMNaCl)、pH=6.5 washing 、pH=6.0 washing buffer、pH =4.0 elution buffer (8M Urea 20mM Sodium Phosphate, 500 mMNaCl ) 结果： 各洗脱液未浓缩，跑胶没有条带。浓缩后，各种洗脱液中都有目的条带。请问这是怎么回事？！有没有谁经常做包涵体纯化的，可以发点相关的资料吗？？？我的邮箱：miaomiaoxia1990@163.com 希望大家能给点意见！现在都快被这蛋白整疯了！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有7人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有8人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 目的蛋白表达纯化，求教高手
已经有12人回复
- 高表达蛋白纯化手册QIAGEN
已经有100人回复
- 包涵体有活性吗？
已经有10人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- 亲们，你们的包涵体蛋白透析会出现沉淀么，郁闷啊，能不能给只个招？？？
已经有5人回复
- 包涵体蛋白纯化不溶解，怎麽办？
已经有20人回复
- 如何解决包涵体复性沉淀问题？
已经有16人回复
- 纯化出的蛋白没有活性，求教！
已经有14人回复
- 包涵体变性、复性
已经有4人回复
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- 蛋白包涵体透析后杂蛋白很多，请教原因
已经有10人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- gst标签，蛋白纯化
已经有25人回复
- 包涵体洗涤后8M尿素不溶解
已经有7人回复
- 【求助/交流】大家做蛋白纯化的都到什么型号柱子，效果怎么样呢
已经有10人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
- 包涵体变性复性
已经有11人回复
lpzl
木虫 (正式写手)
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 4125.1
- 红花: 2
- 帖子: 306
- 在线: 526.2小时
- 虫号: 2412684
- 注册: 2013-04-11
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-12-20 20:18:15
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-22 17:49:05
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-22 17:49:05
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2013-12-22 16:12:55
