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包涵体蛋白纯化 已有1人参与
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我的蛋白性质： 105kDa ,pet17b载体，在N末端有三个大的疏水区，C端有一个连窜的的9肽重复序列，富含gly和asp。 我处理的过程： 1. 400ml的菌液离心后用30ml pH=7.8,0.5 M NaCl，20 mM 磷酸盐，在用压力破碎。 2. 离心取上清，4℃与树脂杂交1小时。 3. 将树脂和样品加入到柱子中，让树脂自然沉淀，并将流出液再次上样。 4. 上样完后PH梯度洗脱。依次用binding buffer（ pH7.8 8 M Urea ，20mM Sodium Phosphate ，500 mMNaCl）、pH=7.0 washing buffer (8M Urea 20mM Sodium Phosphate, 500 mMNaCl)、pH=6.5 washing 、pH=6.0 washing buffer、pH =4.0 elution buffer (8M Urea 20mM Sodium Phosphate, 500 mMNaCl ) 结果： 各洗脱液未浓缩，跑胶没有条带。浓缩后，各种洗脱液中都有目的条带。请问这是怎么回事？！有没有谁经常做包涵体纯化的，可以发点相关的资料吗？？？我的邮箱：miaomiaoxia1990@163.com 希望大家能给点意见！现在都快被这蛋白整疯了！！！ |
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lpzl
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