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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)

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[交流] 蛋白的纯化复性

如题，大肠杆菌发酵的重组蛋白，含有多个半胱氨酸。
提取包涵体，用盐酸胍溶解得溶液后稀释复性（通常是5倍），
问题一：是将蛋白滴到稀释液中还是将稀释液滴到蛋白中，哪种方式好呢？

将稀释好的溶液进行透析复性，一般是3到4次，稀释倍数是5倍、10倍、10倍、最后一次用20mM Tris。
将透析好的溶液上Q株，然后用高浓度的盐洗脱。

问题二：为什么OD280小于260的，且OD260/OD280的比值大于1.6，这个里面是不是含有大量的核酸呢？为什么包涵体电泳结果中，显示有该蛋白质呢？

现在不知道这个实验该怎么进行下去才能得到我要的目的蛋白了，不知道哪位有很好的经验能够和我一起分析，谢谢

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1楼2013-12-17 10:03:30

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diamond-snow

新虫 (初入文坛)

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

具体的变复性过程是怎样呢，我的蛋白也有4个半胱氨酸，不太好复性

发自小木虫Android客户端

4楼2018-08-06 13:04:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

简单回复

2013-12-17 10:28 回复

2013-12-18 17:09 回复

127

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