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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)


[交流] 蛋白的纯化复性

如题,大肠杆菌发酵的重组蛋白,含有多个半胱氨酸。
提取包涵体,用盐酸胍溶解得溶液后稀释复性(通常是5倍),
问题一:是将蛋白滴到稀释液中还是将稀释液滴到蛋白中,哪种方式好呢?

将稀释好的溶液进行透析复性,一般是3到4次,稀释倍数是5倍、10倍、10倍、最后一次用20mM Tris。
将透析好的溶液上Q株,然后用高浓度的盐洗脱。

问题二:为什么OD280小于260的,且OD260/OD280的比值大于1.6,这个里面是不是含有大量的核酸呢?为什么包涵体电泳结果中,显示有该蛋白质呢?

现在不知道这个实验该怎么进行下去才能得到我要的目的蛋白了,不知道哪位有很好的经验能够和我一起分析,谢谢
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diamond-snow

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
具体的变复性过程是怎样呢,我的蛋白也有4个半胱氨酸,不太好复性

发自小木虫Android客户端
4楼2018-08-06 13:04:30
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sjmr12212楼
2013-12-17 10:28   回复  
whiteness3楼
2013-12-18 17:09   回复  
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