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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR后的产物需要纯化么
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echochen1017

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR后的产物需要纯化么

我从一个质粒上P一段基因下来，两段有设计酶切位点，也都加了保护碱基，PCR完事后需要纯化一下再酶切么？我没纯化酶切，有条带，然后连接也是双酶切处理过的载体，转化，一个转化子都没有，求解救！
另，从菌株中提质粒，提出来了，验证后，40μL体系酶切，后跑胶验证，什么都没有，碎的条带都没有，泪！！！请问这是什么情况呢？？
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1楼 2013-12-04 14:15:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-05 21:03:48
直接切也可以，看酶。有些酶对离子强度敏感的就不好说。一般回收后再做酶切的效果更好。
做克隆按照protocol中的用量来会提高成功率。
你提的质粒浓度多少，用了多少酶切，上样量多少。做了对照没有？
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2楼2013-12-04 15:48:22
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-05 21:03:56
建议回收后再继续做，PCR体系中还有好多其他离子，可能对后续实验干扰。
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3楼2013-12-05 17:13:17
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