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汕头大学海洋科学接受调剂
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pangxinyi

新虫 (小有名气)

[求助] 胶体金试纸条控制线不出条带? 已有3人参与

我是做胶体金免疫试纸条的新手,试纸条是自己组装的,控制线点了二抗,羊抗鼠IgG,浓度为0.5-1mg/ml,每条点了1微升,连接垫上的金标抗体也是1微升, 用水跑试纸条,控制线都没有出现条带,是哪里出了问题啊??求解惑
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richujs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
金标条件是多少?重悬后浓缩了几倍?可能是金标用少了

抗体标记的ph优化好了?
思想是能力和力量的源泉
2楼2013-12-02 21:24:20
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pangxinyi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by richujs at 2013-12-02 21:24:20
金标条件是多少?重悬后浓缩了几倍?可能是金标用少了

抗体标记的ph优化好了?

1ML胶体金加入5微升抗体,再加封闭液,重悬后还需要浓缩啊?我就是在加入复溶液后直接点膜的,浓缩多少倍啊?我也怀疑是金标少,PH没有优化,只优化了最佳抗体结合量,胶体金PH影响会很大吗??
3楼2013-12-03 18:04:15
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richujs

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by pangxinyi at 2013-12-03 18:04:15
1ML胶体金加入5微升抗体,再加封闭液,重悬后还需要浓缩啊?我就是在加入复溶液后直接点膜的,浓缩多少倍啊?我也怀疑是金标少,PH没有优化,只优化了最佳抗体结合量,胶体金PH影响会很大吗??...

一般浓缩5~10倍后,再倍比稀释看显色。pH影响灵敏度
思想是能力和力量的源泉
4楼2013-12-03 18:57:57
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pangxinyi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by richujs at 2013-12-03 18:57:57
一般浓缩5~10倍后,再倍比稀释看显色。pH影响灵敏度...

请问怎样操作啊?浓缩后再稀释?还是有点没懂啊,能都指点一下啊,谢谢!!
5楼2013-12-04 09:13:27
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mengjiangnan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
buffer有问题,用pbs试试
6楼2013-12-04 11:52:08
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pangxinyi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by mengjiangnan at 2013-12-04 11:52:08
buffer有问题,用pbs试试

我用的自己配的试纸条缓冲液TBS(Tris, Nacl)可不可以呢?
7楼2013-12-04 14:40:12
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mengjiangnan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by pangxinyi at 2013-12-04 14:40:12
我用的自己配的试纸条缓冲液TBS(Tris, Nacl)可不可以呢?...

tris-Hcl 效果不太好
8楼2013-12-05 03:01:07
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Anmy99

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我的是1ML胶体金加了抗体后封闭,离心,再0.1ML重悬,相当于10倍浓缩了。之后再稀释,至于稀释的倍数就看显色强度来决定了。
9楼2014-02-28 16:15:45
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Anmy99

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PH影响很大的,PH会影响金子与抗体的结合程度,过酸过碱都会死金,结果就做不出来了。
10楼2014-02-28 16:18:03
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