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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求教解释下为什么PCR时提高退火温度可以提高连接的特异性？
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无敌小莫

铜虫 (小有名气)

[求助] 求教解释下为什么PCR时提高退火温度可以提高连接的特异性？

不太懂这个 做的也好乱 要做的是将一种酶的基因从PET28a中转接到PET32a中，因为在前者之中表达出的产物不溶，所以是要换一个载体。做PCR的时候我就想直到为什么PCR提高退火温度就可以提高引物特异性，减少引物二聚体的产生呢？【哎  我只是个本科生  金币就这么点了 】
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1楼 2013-12-01 22:57:31
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拂晓晨风

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-02 01:40:30
简单点说温度低，可以结合的序列就多一点，正确的错误的都能结合，特异性低，pcr产物可能不正确。温度高时，就只有特异性很强的引物和目标序列结合了。
pet28的质粒你们可以降低下温度看能否成为可溶蛋白。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2013-12-02 00:37:21
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
温度的本质就是粒子的活动程度
温度越高 粒子的活动能力就越强 自然就不容易被其他粒子束缚
DNA引物和模板的结合是氢键 一种相对较弱的作用力
因此 氢键的数量（配对碱基）的数量直接决定了这种结合的稳定性
之所以被称为特异性结合 就是因为引物与模板间基本可以完美匹配（通用引物也不会差几个碱基的）
所以相对非特异性结合 特异性结合具有更高的稳定性 也就能耐受更高的温度
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3楼2013-12-02 09:37:32
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