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Irus

新虫 (初入文坛)

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[求助] 荧光定量pcr熔解曲线问题——质粒与样品的峰不在一条上已有1人参与

如图，检测结果发现样品的条带较宽

熔解曲线

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1楼2013-11-30 15:33:18

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Irus

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引用回帖:

6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-01 14:38:09
跑电泳的分辨率不是很高，即使是一条带也有可能是分子量接近的不同分子的混合物。熔解曲线的温度不仅和产物长度有关，产物的序列也会影响熔解温度，所以更加灵敏。我觉得你的引物的特异性可能有问题。如果是质粒， ...

引物的特异性应该是没问题的，是细菌的通用引物338和518，我们实验室的其他人也用的这个，做的还行啊，就到我这里我重新提取的质粒那个峰很窄，我做了别的菌像尖孢镰刀菌和芽孢杆菌的质粒熔解曲线也都很宽，是不是我这个质粒提取的有问题。