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zds2257

铁杆木虫 (小有名气)

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[求助] 荧光定量Ct值

请问下做半定量内参基因条带正常，目的基因表达量很低条带很弱。再拿去做荧光定量内参的Ct值是23也正常，但是目的基因Ct值是15，按道理这种情况目的基因Ct值不是应该较大吗？还是因为表达量太小，导致仪器检测荧光有问题？

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1楼 2013-11-28 12:39:51

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cicelyzh

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引用回帖:

8楼: Originally posted by zds2257 at 2013-11-29 14:23:06
回头看看这条件和半定量用的一样半定量是条带很特异啊...

半定量与荧光定量用的试剂和酶不同，有时候会有些差别。从扩增曲线和熔解曲线是否有异常多少可以看出PCR体系是否建立得正确，模板浓度是否合适。

9楼2013-11-30 02:40:37

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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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zds2257: 金币+2 2013-11-28 16:51:40
zds2257: 金币+18, 3个重复相对定量模板浓度没调 2013-11-28 16:53:56

我也觉着怪异啊，怎么CT值反而小了,做了几个重复啊，模板一样多吗

2楼2013-11-28 13:00:47

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hl16010921

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【答案】应助回帖

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zds2257: 金币+2 2013-11-28 16:58:52

拿荧光PCR产物跑个电泳看看长度对不对。看熔解曲线的Tm值是否异常。是不是引物二聚体或非特异扩增？

3楼2013-11-28 14:09:04

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zds2257

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引用回帖:

3楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-11-28 14:09:04
拿荧光PCR产物跑个电泳看看长度对不对。看熔解曲线的Tm值是否异常。是不是引物二聚体或非特异扩增？

普通PCR跑的半定量条带单一没有其他杂带荧光PCR产物跑完都不管了

4楼2013-11-28 16:57:22

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