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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求教，荧光定量PCR标曲问题
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[求助] 求教，荧光定量PCR标曲问题

本人做标曲做了5个点，但是总是有一个点没做好，剔除那个点后，线性还算好，扩增效率90%~110%之间，引物特异性是考察过的，有稍微的引物峰，但未超过阈值，因为做过几次了，还是这样，且做实验试剂耗材已用完，仪器使用需收费，想了解下，4个点虽然不严谨，但可否接受呢？在此附上图片，请大侠分析，谢谢啦！
求教，荧光定量PCR标曲问题
1.jpg


求教，荧光定量PCR标曲问题-1
2.jpg
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思路决定出路。。。
1楼 2013-11-25 22:38:40
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-26 11:07:58
要我说你发文章用的话不太赖斯了。5个点是起步价。当然。如果你的所有目的基因在4个点的范围内。那也就将就凑合能用来分析。还是那句话。5个点是起步价啊。专家估计不会认可的~当然你的扩增效率还蛮高的。然后ct也落 ...

我问了技术支持，技术支持说勉强能用，我的所有目的基因基本上可以落在4个点范围内，少数样品表达量很低的Cq都在30后了
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思路决定出路。。。
7楼2013-11-26 18:58:38
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
坐等解答  我也要做以后 学习了
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生命不息奋斗不止
2楼2013-11-26 00:04:20
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zzl2516

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmcyjxs: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-26 18:55:22
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-27 12:37:45
你这扩增能曲线都没有到平台期肯定不行，建议提高模板和引物浓度，使扩增曲线打到平台期，让CT值提前一些，最好到10-20之间吧
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3楼2013-11-26 08:37:57
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bio-li

金虫 (小有名气)
这个图做标曲应该是不行的，而且标曲的点应该是5-7个
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你不能解决问题，你就会成为问题
4楼2013-11-26 10:11:20
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