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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)

[求助] sds-page跑胶

sds-page测蛋白质分子量,12%分离胶和5%浓缩胶,marker能跑出来,蛋白质跑不出来,做了好几次,但都只有marker跑出来。(1,2图)
我们认为蛋白质分子量是部署太小了,改成15%分离胶和5%浓缩胶(没用marker),(3图)
sds-page跑胶
20131123234.jpg


sds-page跑胶-1
20131106228.jpg


sds-page跑胶-2
131125000.jpg
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-25 20:32:13
xiaoxiao0301: 金币+5, 有帮助, 今天提高浓度试了一下,刚进行脱色,希望能成功。我们做的应该算大分子量的。 2013-11-27 19:22:29
先测下样品蛋白浓度,是不是浓度太低了?
如果样品是小分子量蛋白,建议用Tricine-SDS-PAGE胶跑。
2楼2013-11-25 20:01:32
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-11-25 20:01:32
先测下样品蛋白浓度,是不是浓度太低了?
如果样品是小分子量蛋白,建议用Tricine-SDS-PAGE胶跑。

结果和以前一样,样品没有条带,这不是小分子,是不是浓缩胶的问题?
3楼2013-11-27 21:31:11
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-09 08:38:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoxiao0301 at 2013-11-27 21:31:11
结果和以前一样,样品没有条带,这不是小分子,是不是浓缩胶的问题?...

浓缩胶5%也不会出什么问题,看你跑的胶浓缩胶上面也没蛋白。
你检查下分离胶是不是配错了,看你的第二块胶前沿有些泳道是有蛋白的。还有一个可能是你的样品没处理好。
4楼2013-11-28 07:35:09
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jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的蛋白分子量是多少?如果是小分子,跑不出来很正常。建议换成三层胶试试。
求是
5楼2013-11-28 08:55:04
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-28 08:55:04
你的蛋白分子量是多少?如果是小分子,跑不出来很正常。建议换成三层胶试试。

10的五次方左右
6楼2013-11-28 10:12:32
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-11-28 07:35:09
浓缩胶5%也不会出什么问题,看你跑的胶浓缩胶上面也没蛋白。
你检查下分离胶是不是配错了,看你的第二块胶前沿有些泳道是有蛋白的。还有一个可能是你的样品没处理好。...

配方应该没错,我再试一下Tricine-SDS-PAGE胶吧
7楼2013-11-28 10:25:00
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by xiaoxiao0301 at 2013-11-28 10:25:00
配方应该没错,我再试一下Tricine-SDS-PAGE胶吧...

如果蛋白分子量是10的五次方左右,而不是10kD左右或者更小,不建议用Tricine-SDS-PAGE,那是跑小分子多肽和蛋白的。
8楼2013-11-28 10:30:27
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-28 08:55:04
你的蛋白分子量是多少?如果是小分子,跑不出来很正常。建议换成三层胶试试。

10的四次方至10的五次方,这是文献上的参考值
9楼2013-11-28 10:30:28
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-11-28 10:30:27
如果蛋白分子量是10的五次方左右,而不是10kD左右或者更小,不建议用Tricine-SDS-PAGE,那是跑小分子多肽和蛋白的。...

那我提高分离胶的浓度再试一下,是不是我选的分离胶浓度有问题
10楼2013-11-28 10:33:41
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