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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)

[求助] sds-page跑胶

sds-page测蛋白质分子量，12%分离胶和5%浓缩胶，marker能跑出来，蛋白质跑不出来，做了好几次，但都只有marker跑出来。（1,2图）
我们认为蛋白质分子量是部署太小了，改成15%分离胶和5%浓缩胶（没用marker），（3图）
sds-page跑胶
20131123234.jpg


sds-page跑胶-1
20131106228.jpg


sds-page跑胶-2
131125000.jpg
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1楼 2013-11-25 15:14:27
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-25 20:32:13
xiaoxiao0301: 金币+5, ★有帮助, 今天提高浓度试了一下，刚进行脱色，希望能成功。我们做的应该算大分子量的。 2013-11-27 19:22:29
先测下样品蛋白浓度，是不是浓度太低了？
如果样品是小分子量蛋白，建议用Tricine-SDS-PAGE胶跑。
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2楼2013-11-25 20:01:32
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-11-25 20:01:32
先测下样品蛋白浓度，是不是浓度太低了？
如果样品是小分子量蛋白，建议用Tricine-SDS-PAGE胶跑。

结果和以前一样，样品没有条带，这不是小分子，是不是浓缩胶的问题？
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3楼2013-11-27 21:31:11
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-09 08:38:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaoxiao0301 at 2013-11-27 21:31:11
结果和以前一样，样品没有条带，这不是小分子，是不是浓缩胶的问题？...

浓缩胶5%也不会出什么问题，看你跑的胶浓缩胶上面也没蛋白。
你检查下分离胶是不是配错了，看你的第二块胶前沿有些泳道是有蛋白的。还有一个可能是你的样品没处理好。
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4楼2013-11-28 07:35:09
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jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的蛋白分子量是多少？如果是小分子，跑不出来很正常。建议换成三层胶试试。
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求是
5楼2013-11-28 08:55:04
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-28 08:55:04
你的蛋白分子量是多少？如果是小分子，跑不出来很正常。建议换成三层胶试试。

10的五次方左右
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6楼2013-11-28 10:12:32
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-11-28 07:35:09
浓缩胶5%也不会出什么问题，看你跑的胶浓缩胶上面也没蛋白。
你检查下分离胶是不是配错了，看你的第二块胶前沿有些泳道是有蛋白的。还有一个可能是你的样品没处理好。...

配方应该没错，我再试一下Tricine-SDS-PAGE胶吧
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7楼2013-11-28 10:25:00
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by xiaoxiao0301 at 2013-11-28 10:25:00
配方应该没错，我再试一下Tricine-SDS-PAGE胶吧...

如果蛋白分子量是10的五次方左右，而不是10kD左右或者更小，不建议用Tricine-SDS-PAGE，那是跑小分子多肽和蛋白的。
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8楼2013-11-28 10:30:27
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jennifermatt at 2013-11-28 08:55:04
你的蛋白分子量是多少？如果是小分子，跑不出来很正常。建议换成三层胶试试。

10的四次方至10的五次方，这是文献上的参考值
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9楼2013-11-28 10:30:28
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xiaoxiao0301

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-11-28 10:30:27
如果蛋白分子量是10的五次方左右，而不是10kD左右或者更小，不建议用Tricine-SDS-PAGE，那是跑小分子多肽和蛋白的。...

那我提高分离胶的浓度再试一下，是不是我选的分离胶浓度有问题
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10楼2013-11-28 10:33:41
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