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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 纯化 分子筛
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)

[求助] 纯化 分子筛

我用分子筛纯化蛋白，按理说分子筛纯化蛋白不会有太大的损失，但是我现在用分子筛纯化，蛋白回收率只有15%，不知道蛋白都损失在哪里了，我纯化的蛋白是刚刚复性好的蛋白
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1楼 2013-11-13 13:23:23
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-11-14 08:38:21
看一下用什么方法来浓缩，测一下浓缩前后的酶活力。也有可能是复性是不完全的复性，折腾一下就又不行了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2013-11-13 14:58:11
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wizardfan: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-11-14 08:38:47
支持2楼，估计是你的复性蛋白不太稳定，
建议过分子筛前测一下蛋白浓度，
不能以复性前蛋白量就是复性后的蛋白的量，
复性回收率一般比较低。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
3楼2013-11-13 20:33:29
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小李爱学习

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

蛋白纯化过程中任何步骤都有损失，酶活性的损失更大。有各种原因，比如蛋白酶分解，填料吸附等。加蛋白酶抑制剂可以抑制蛋白酶的水解。分子筛缓冲液一般氯化钠浓度为0.15M 这样可以降低填料对蛋白的疏水性吸附。我认为损失还有更多的原因，不必纠结，能得到需要的蛋白就赶紧做下一步的实验吧，祝君好运！
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4楼2013-11-24 21:51:00
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