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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 293细胞真核表达，最终表达在什么地方
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lipanxy2

新虫 (初入文坛)

[求助] 293细胞真核表达，最终表达在什么地方

细菌粘附素重组质粒在293细胞中表达，载体为pcDNA3。最终蛋白会表达在哪里？
我用的是cell lysis buffer裂解细胞，离心取上清。然后western blot检测，但是始终检测不到特异表达。
求助求助
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1楼 2013-10-30 17:42:12
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lipanxy2(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-10-31 13:28:19
这个蛋白表达出来很有可能在细胞的胞浆里面，你用WB检测不到特异表达，有几种情况：
1. 你的抗体不灵，压不出来条带，是否有阳性对照？可以克隆一个带tag的表达载体，比如在蛋白N或者C端fusion一个flag, HA 或者myc,His的tag，用tag抗体来检测

2. 蛋白根本没有表达，可能是克隆错误，基因移码突变了，或者表达载体有问题，检查下载体构建是否正确或者换个载体表达
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-10-30 22:42:09
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huoyongting

金虫 (正式写手)
楼主用的是239的哪种细胞呀
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3楼2013-10-31 11:04:54
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lipanxy2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-10-30 22:42:09
这个蛋白表达出来很有可能在细胞的胞浆里面，你用WB检测不到特异表达，有几种情况：
1. 你的抗体不灵，压不出来条带，是否有阳性对照？可以克隆一个带tag的表达载体，比如在蛋白N或者C端fusion一个flag, HA 或者my ...

你好，我已经通过RT-PCR检测到有表达，有阳性对照，可以压出条带的。只是这个转染的没有特异性的条带。
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4楼2013-10-31 15:16:17
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lipanxy2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huoyongting at 2013-10-31 11:04:54
楼主用的是239的哪种细胞呀

就是293细胞
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5楼2013-10-31 15:29:23
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zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-31 20:14:56
如果平行实验蛋白提取方法没有问题，怀疑你的序列问题，是否测序正确。。还要这个蛋白是分泌蛋白么？会在胞外丰度比较高么？
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6楼2013-10-31 17:12:29
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
您好，想了解一下您做293表达是如何做的，有相关的资料吗，最近需要自己做，但是完全不会啊！！有更多真核蛋白表达相关方面的资料更好，谢谢，Q2387610666
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-07-27 16:57:28
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