24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1086  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lipanxy2

新虫 (初入文坛)

[求助] 293细胞真核表达,最终表达在什么地方

细菌粘附素重组质粒在293细胞中表达,载体为pcDNA3。最终蛋白会表达在哪里?
我用的是cell lysis buffer裂解细胞,离心取上清。然后western blot检测,但是始终检测不到特异表达。
求助求助
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

您好,想了解一下您做293表达是如何做的,有相关的资料吗,最近需要自己做,但是完全不会啊!!有更多真核蛋白表达相关方面的资料更好,谢谢,Q2387610666
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-07-27 16:57:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lipanxy2(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-10-31 13:28:19
这个蛋白表达出来很有可能在细胞的胞浆里面,你用WB检测不到特异表达,有几种情况:
1. 你的抗体不灵,压不出来条带,是否有阳性对照?可以克隆一个带tag的表达载体,比如在蛋白N或者C端fusion一个flag, HA 或者myc,His的tag,用tag抗体来检测

2. 蛋白根本没有表达,可能是克隆错误,基因移码突变了,或者表达载体有问题,检查下载体构建是否正确或者换个载体表达
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-10-30 22:42:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huoyongting

金虫 (正式写手)

楼主用的是239的哪种细胞呀
3楼2013-10-31 11:04:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lipanxy2

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-10-30 22:42:09
这个蛋白表达出来很有可能在细胞的胞浆里面,你用WB检测不到特异表达,有几种情况:
1. 你的抗体不灵,压不出来条带,是否有阳性对照?可以克隆一个带tag的表达载体,比如在蛋白N或者C端fusion一个flag, HA 或者my ...

你好,我已经通过RT-PCR检测到有表达,有阳性对照,可以压出条带的。只是这个转染的没有特异性的条带。
4楼2013-10-31 15:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工085600 310分求调剂 +11 0856材料与化工3 2026-04-04 13/650 2026-04-05 12:50 by 418490947
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 一志愿西北农林畜牧专硕336分求调剂 +3 5ourr 2026-04-03 3/150 2026-04-05 10:40 by JOKER0401
[考研] 295求调剂 +3 尚偌呀 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:23 by zhq0425
[考研] 326分求调剂 +3 于是乎呢 2026-04-01 5/250 2026-04-03 14:23 by 于是乎呢
[考研] 求调剂 +3 心想事成可 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:22 by wangjy2002
[考研] 085600 295分求调剂 +19 W55j 2026-03-30 23/1150 2026-04-03 09:53 by 千千运气
[考研] 一志愿复旦材料,英一专硕,总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 260求调剂 +6 朱芷琳 2026-04-02 6/300 2026-04-02 20:27 by 6781022
[考研] 264分,求任意工科调剂 +4 zzlqwq 2026-03-29 5/250 2026-04-02 17:17 by 何曾几何
[考研] 一志愿郑大材料工程290求调剂 +20 Youth_ 2026-03-30 20/1000 2026-04-02 14:48 by 5896
[考研] 311求调剂 +14 蓝月亮亮 2026-03-30 14/700 2026-04-02 12:18 by 1753564080
[考研] 材料工程322分 +8 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 8/400 2026-04-02 11:53 by 3041
[考研] 0856初试324分求调剂 +6 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 11:42 by 星空星月
[考研] 一志愿北京科技,085601总分305求调剂 +9 半生瓜! 2026-04-01 11/550 2026-04-02 08:28 by Wang200018
[考研] 求调剂,一志愿南京师范大学计算机专硕,初试373,六级通过, +3 计算机追梦人 2026-04-01 3/150 2026-04-02 07:57 by fxue1114
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 16/800 2026-04-01 17:58 by 邱gl
[考研] 0703一志愿南师大334求调剂 +4 seven7yu 2026-03-30 4/200 2026-04-01 16:10 by oooqiao
[考研] 288资源与环境专硕求调剂,不限专业,有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
信息提示
请填处理意见