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lipanxy2

新虫 (初入文坛)

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[求助] 293细胞真核表达，最终表达在什么地方

细菌粘附素重组质粒在293细胞中表达，载体为pcDNA3。最终蛋白会表达在哪里？
我用的是cell lysis buffer裂解细胞，离心取上清。然后western blot检测，但是始终检测不到特异表达。
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1楼 2013-10-30 17:42:12

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gyesang

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【答案】应助回帖

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lipanxy2(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-10-31 13:28:19

这个蛋白表达出来很有可能在细胞的胞浆里面，你用WB检测不到特异表达，有几种情况：
1. 你的抗体不灵，压不出来条带，是否有阳性对照？可以克隆一个带tag的表达载体，比如在蛋白N或者C端fusion一个flag, HA 或者myc,His的tag，用tag抗体来检测

2. 蛋白根本没有表达，可能是克隆错误，基因移码突变了，或者表达载体有问题，检查下载体构建是否正确或者换个载体表达

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2楼2013-10-30 22:42:09

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