应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 293细胞真核表达，最终表达在什么地方
71/1返回列表
查看: 1264  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lipanxy2

新虫 (初入文坛)

[求助] 293细胞真核表达，最终表达在什么地方

细菌粘附素重组质粒在293细胞中表达，载体为pcDNA3。最终蛋白会表达在哪里？
我用的是cell lysis buffer裂解细胞，离心取上清。然后western blot检测，但是始终检测不到特异表达。
求助求助
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-30 17:42:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lipanxy2(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-10-31 13:28:19
这个蛋白表达出来很有可能在细胞的胞浆里面，你用WB检测不到特异表达，有几种情况：
1. 你的抗体不灵，压不出来条带，是否有阳性对照？可以克隆一个带tag的表达载体，比如在蛋白N或者C端fusion一个flag, HA 或者myc,His的tag，用tag抗体来检测

2. 蛋白根本没有表达，可能是克隆错误，基因移码突变了，或者表达载体有问题，检查下载体构建是否正确或者换个载体表达
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-10-30 22:42:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huoyongting

金虫 (正式写手)
楼主用的是239的哪种细胞呀
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-31 11:04:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lipanxy2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-10-30 22:42:09
这个蛋白表达出来很有可能在细胞的胞浆里面，你用WB检测不到特异表达，有几种情况：
1. 你的抗体不灵，压不出来条带，是否有阳性对照？可以克隆一个带tag的表达载体，比如在蛋白N或者C端fusion一个flag, HA 或者my ...

你好，我已经通过RT-PCR检测到有表达，有阳性对照，可以压出条带的。只是这个转染的没有特异性的条带。
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-31 15:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lipanxy2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by huoyongting at 2013-10-31 11:04:54
楼主用的是239的哪种细胞呀

就是293细胞
回复此楼
5楼2013-10-31 15:29:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-31 20:14:56
如果平行实验蛋白提取方法没有问题，怀疑你的序列问题，是否测序正确。。还要这个蛋白是分泌蛋白么？会在胞外丰度比较高么？
赞一下 回复此楼
6楼2013-10-31 17:12:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
您好，想了解一下您做293表达是如何做的，有相关的资料吗，最近需要自己做，但是完全不会啊！！有更多真核蛋白表达相关方面的资料更好，谢谢，Q2387610666
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-07-27 16:57:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lipanxy2 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-05 13:44 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:33 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 6/300 2026-11-05 13:22 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:22 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-05 13:13 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:11 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 13:11 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 13:11 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 7/350 2026-11-05 13:00 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 13:00 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-05 12:51 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 12:16 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 7/350 2026-11-05 11:12 by PYZmcHr5kSaq
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 11:01 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 10:59 by PYZmcHr5kSaq
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-05 10:48 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 10:39 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 9/450 2026-11-05 09:20 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭