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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】真核细胞转化质粒是否要酶切成线性？
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溪儿维娅

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】真核细胞转化质粒是否要酶切成线性？ 已有3人参与

如题，不知道各位大虾有没有做真核细胞转化的，构建的载体是不是要酶切成线性才能转化？这个酶切是不是要用特定的酶过夜单酶切还是随机的酶？
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1楼 2011-04-11 14:09:34
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david_xmu

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+5): good 2011-04-12 08:25:01
是否将质粒线性化还要看你的实验目的了。如果需要转进细胞后重组的话，一般是需要线性化，需要线性化的质粒上会有特定的酶切位点的，单酶切。要确保你插入的目的片段不含有这个单酶切的位点，不然只有换个别的质粒或者把你的目的基因的这个位点突变一下。楼主如果能把你的实验目的表述更清楚一些就好了。祝实验顺利哈
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2楼2011-04-12 03:17:40
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-04-12 08:25:14
如果要整合到染色体上的需要单酶切处理。
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3楼2011-04-12 07:55:31
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溪儿维娅

铜虫 (小有名气)
这么快就有大侠回复了，谢谢O(∩_∩)O
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4楼2011-04-13 16:33:43
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