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溪儿维娅

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】真核细胞转化质粒是否要酶切成线性? 已有3人参与

如题,不知道各位大虾有没有做真核细胞转化的,构建的载体是不是要酶切成线性才能转化?这个酶切是不是要用特定的酶过夜单酶切还是随机的酶?
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david_xmu

金虫 (小有名气)

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dhd997(金币+5): good 2011-04-12 08:25:01
是否将质粒线性化还要看你的实验目的了。如果需要转进细胞后重组的话,一般是需要线性化,需要线性化的质粒上会有特定的酶切位点的,单酶切。要确保你插入的目的片段不含有这个单酶切的位点,不然只有换个别的质粒或者把你的目的基因的这个位点突变一下。楼主如果能把你的实验目的表述更清楚一些就好了。祝实验顺利哈
2楼2011-04-12 03:17:40
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2): good 2011-04-12 08:25:14
如果要整合到染色体上的需要单酶切处理。
3楼2011-04-12 07:55:31
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溪儿维娅

铜虫 (小有名气)

这么快就有大侠回复了,谢谢O(∩_∩)O
4楼2011-04-13 16:33:43
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