应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何构建质粒以及提取它
51/1返回列表
查看: 2256  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Qing岳

银虫 (初入文坛)

[交流] 如何构建质粒以及提取它

我要构建一个质粒，但是基本的方法和过程不是很清楚，需要从最基本的开始，请问大概的步骤是怎么样的啊。。
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

hjyxm

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-10-30 15:49:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hjyxm

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-31 12:42:39
质粒构建一般是：目的序列的扩增---与质粒连接----转化---再提取质粒---鉴定；这个是分子生物学很基础的东西，基本上很多分子生物学书上就有，或者相关的文献！
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-31 09:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

b6122

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-31 12:42:48
最好去分子生物学实验室学习10天，就什么都知道了。
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-31 11:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gan19920717

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先你得分别把  含有目的基因和空载克隆载体的菌种养出来，一般过夜，然后用质粒提取试剂盒分别提取他们，pcr你的目的基因，同种酶双酶切载体与目的基因，构建酶连体系，然后你构建出了重组质粒，随后再进行相关鉴定~~  可参考下相关的分子生物学实验手册上有相关的步骤方法
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-02 09:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

众星揽月

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1. 通过PCR扩增目的基因片段
PCR要设计引物，设计引物时要选择合适的同源序列，根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点，PCR的产物要纯化。
2. 酶切
根据引物设计的酶切位点，分别对PCR产物和质粒载体进行酶切，酶切后的产物也要进行回收
3. 连接
通过连接酶将酶切后的PCR产物和质粒载体进行连接
4. 转化
将连接产物转化到受体菌中（一般为DH5a），涂板，培养过夜
5. 挑取单克隆，并鉴定
挑去平板上的单克隆培养，可以通过PCR或者酶切初步鉴定阳性克隆，对初步鉴定出来的阳性克隆进行测序

英格恩 Engreen
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-02 11:37:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Qing岳 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +3 pin8023 2026-02-28 5/250 2026-03-02 00:24 by 花YOU重开日
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭