应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何构建质粒以及提取它
51/1返回列表
查看: 2508  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Qing岳

银虫 (初入文坛)

[交流] 如何构建质粒以及提取它

我要构建一个质粒，但是基本的方法和过程不是很清楚，需要从最基本的开始，请问大概的步骤是怎么样的啊。。
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

hjyxm

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-10-30 15:49:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hjyxm

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-31 12:42:39
质粒构建一般是：目的序列的扩增---与质粒连接----转化---再提取质粒---鉴定；这个是分子生物学很基础的东西，基本上很多分子生物学书上就有，或者相关的文献！
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-31 09:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

b6122

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-31 12:42:48
最好去分子生物学实验室学习10天，就什么都知道了。
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-31 11:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gan19920717

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先你得分别把  含有目的基因和空载克隆载体的菌种养出来，一般过夜，然后用质粒提取试剂盒分别提取他们，pcr你的目的基因，同种酶双酶切载体与目的基因，构建酶连体系，然后你构建出了重组质粒，随后再进行相关鉴定~~  可参考下相关的分子生物学实验手册上有相关的步骤方法
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-02 09:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

众星揽月

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1. 通过PCR扩增目的基因片段
PCR要设计引物，设计引物时要选择合适的同源序列，根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点，PCR的产物要纯化。
2. 酶切
根据引物设计的酶切位点，分别对PCR产物和质粒载体进行酶切，酶切后的产物也要进行回收
3. 连接
通过连接酶将酶切后的PCR产物和质粒载体进行连接
4. 转化
将连接产物转化到受体菌中（一般为DH5a），涂板，培养过夜
5. 挑取单克隆，并鉴定
挑去平板上的单克隆培养，可以通过PCR或者酶切初步鉴定阳性克隆，对初步鉴定出来的阳性克隆进行测序

英格恩 Engreen
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-02 11:37:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Qing岳 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭