24小时热门版块排行榜    

查看: 2254  |  回复: 4

Qing岳

银虫 (初入文坛)


[交流] 如何构建质粒以及提取它

我要构建一个质粒,但是基本的方法和过程不是很清楚,需要从最基本的开始,请问大概的步骤是怎么样的啊。。
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hjyxm

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-31 12:42:39
质粒构建一般是:目的序列的扩增---与质粒连接----转化---再提取质粒---鉴定;这个是分子生物学很基础的东西,基本上很多分子生物学书上就有,或者相关的文献!
2楼2013-10-31 09:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

b6122

木虫 (正式写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-10-31 12:42:48
最好去分子生物学实验室学习10天,就什么都知道了。
3楼2013-10-31 11:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gan19920717

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先你得分别把  含有目的基因和空载克隆载体的菌种养出来,一般过夜,然后用质粒提取试剂盒分别提取他们,pcr你的目的基因,同种酶双酶切载体与目的基因,构建酶连体系,然后你构建出了重组质粒,随后再进行相关鉴定~~  可参考下相关的分子生物学实验手册上有相关的步骤方法
4楼2013-11-02 09:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

众星揽月

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1. 通过PCR扩增目的基因片段
PCR要设计引物,设计引物时要选择合适的同源序列,根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点,PCR的产物要纯化。
2. 酶切
根据引物设计的酶切位点,分别对PCR产物和质粒载体进行酶切,酶切后的产物也要进行回收
3. 连接
通过连接酶将酶切后的PCR产物和质粒载体进行连接
4. 转化
将连接产物转化到受体菌中(一般为DH5a),涂板,培养过夜
5. 挑取单克隆,并鉴定
挑去平板上的单克隆培养,可以通过PCR或者酶切初步鉴定阳性克隆,对初步鉴定出来的阳性克隆进行测序

英格恩 Engreen
5楼2015-09-02 11:37:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Qing岳 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料化工调剂 +11 今夏不夏 2026-03-01 12/600 2026-03-01 22:33 by 刘兵
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 材料学硕318求调剂 +3 February_Feb 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:21 by gaoxiaoniuma
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分,求调剂 +3 wsl111 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:38 by ms629
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 11/550 2026-03-01 19:47 by 无懈可击111
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂; 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 284求调剂 +6 天下熯 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:19 by Ducount.Y
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
请填处理意见