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benedictchau铜虫 (小有名气)
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关于发酵液中蛋白提取 已有2人参与
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大牛们，小弟研一 刚做了一株菌，老板想让我分析一下它的抑菌物质具体成分， 跑过活性电泳 有带但是回收后感觉没有抑菌活性了- - 大家还有什么好的建议么？ 我想先看看这个到底是不是蛋白质 |
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laozuzunzhe: MicEPI+1, 鼓励热心应助！ 2013-10-30 21:17:14
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可以是可以，但是你的这个物质最好是能定量，确切知道进行了某一个处理之后能够保留多少。牛津杯法不知道能不能精确定量，这个方法挺麻烦的。 处理方法不宜一下子就进行两个，比如超滤和煮沸这两个，如果之前都不知道每一个方法的效果，结合起来就更加说不清了。哪一步处理之后有多纯，回收多少，最怕就是糊里糊涂的做，做完之后也还是糊里糊涂。 为什么要一开始就确定是不是蛋白质？假如是几个氨基酸残基的寡肽，没有二级结构的，即使是煮沸也不会灭活的。而即使是蛋白质，也不一定就不能耐受萃取中的有机溶剂，就像是某些酶能耐受高浓度有机溶剂，例如： Biochemical characterization of an extracellular polyextremophilic alpha-amylase from the halophilic archaeon Halorubrum xinjiangense有机溶剂.pdf Effect of non aqueous solvent on structural stability of alpha-amylase A cost-effective prospective for protein stabilization有机溶剂.pdf 2012年 有机溶剂 IF(2011)=1.683 Purification and characterization of an organic solvent-tolerant alkaline cellulase from a halophilic isolate of Thalassobacillus.pdf 2012年 有机溶剂 IF(2011)=2.735 Purification and characterization of an organic-solvent-tolerant cellulase from a halotolerant isolate, Bacillus sp. L1.pdf 最好就是设计一些方案来分离，按照分离效果来一步步减少杂质，最终得到纯品，这下子再鉴定就完全明白了，在此之前的都只能是猜测。别偷懒，在等待的时间里可以同时尝试，不要等菌长的时候就去看PPS。 你的这句“跑过活性电泳 有带但是回收后感觉没有抑菌活性了”是什么意思？“活性电泳”、“有带”、“回收”、“感觉”这四个词，我猜你的这个实验出了问题了，设计上或者操作上。活性电泳和非变性电泳是不同的，非变性电泳是保持非变性，但活性电泳不一定要保持非变性，只要能复性就行，而且要体现出活性。我猜你是跑了非变性电泳然后把蛋白质条带割下来回收了。这么做有一个前提，那就是这个物质肯定是蛋白质，而且能跑胶跑得出来，但其实这个物质还不一定是蛋白质。“感觉”这个词令我怀疑有没有准确定量。不管怎么说，还是把自己的实验步骤操作试剂分析放上来的好。 |
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2013-10-30 19:09:03, 1.68 M
11楼2013-10-30 19:17:08
benedictchau
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2楼2013-10-25 11:16:01
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4楼2013-10-27 00:44:37
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5楼2013-10-28 21:14:16
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6楼2013-10-28 21:22:58
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7楼2013-10-28 23:16:18
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9楼2013-10-30 08:27:49
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