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benedictchau

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于发酵液中蛋白提取 已有2人参与

大牛们,小弟研一 刚做了一株菌,老板想让我分析一下它的抑菌物质具体成分,
跑过活性电泳 有带但是回收后感觉没有抑菌活性了- -
大家还有什么好的建议么?
我想先看看这个到底是不是蛋白质
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

大家帮我看下吧,谢谢你们啊!!!
2楼2013-10-25 11:16:01
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

求帮助啊 大神们
3楼2013-10-25 20:29:39
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-10-27 00:44:37
那你就设计一些实验来对成分进行分离,看看哪些组分里有活性,也不一定是蛋白质的。

现在就是没数到底设计啥实验的- -唉,条件艰苦- -
5楼2013-10-28 21:14:16
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lmqml24 at 2013-10-28 21:22:58
发酵液高温处理,如果有活性可以排除蛋白。排除蛋白之后可以进行有机溶剂萃取等步骤,建议查阅该类菌株的相关报道和参考天然产物的分离...

谢谢回复,我慢慢摸索下
8楼2013-10-29 15:18:54
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-10-28 23:16:18
实质上就是多种处理方式,最终达到分离。萃取,加热,过滤,酸碱处理等,在不确定的时候只能是多种手段摸索。

我想问一下3K的滤膜 超滤之后得到的滤液 一部分沸水浴 10min 另一部分保持原样牛津杯法测量  若煮沸的没有抑菌圈 能说明抑菌物质是蛋白质么  3K与蛋白质分子量单位如何转化啊? 跪谢
9楼2013-10-30 08:27:49
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lmqml24 at 2013-10-28 21:22:58
发酵液高温处理,如果有活性可以排除蛋白。排除蛋白之后可以进行有机溶剂萃取等步骤,建议查阅该类菌株的相关报道和参考天然产物的分离...

我想问一下3K的滤膜 超滤之后得到的滤液 一部分沸水浴 10min 另一部分保持原样牛津杯法测量  若煮沸的没有抑菌圈 能说明抑菌物质是蛋白质么  3K与蛋白质分子量单位如何转化啊? 跪谢
10楼2013-10-30 08:28:59
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-10-30 19:17:08
可以是可以,但是你的这个物质最好是能定量,确切知道进行了某一个处理之后能够保留多少。牛津杯法不知道能不能精确定量,这个方法挺麻烦的。

处理方法不宜一下子就进行两个,比如超滤和煮沸这两个,如果之前都 ...

谢谢您!!!
12楼2013-10-31 09:03:50
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-10-30 19:17:08
可以是可以,但是你的这个物质最好是能定量,确切知道进行了某一个处理之后能够保留多少。牛津杯法不知道能不能精确定量,这个方法挺麻烦的。

处理方法不宜一下子就进行两个,比如超滤和煮沸这两个,如果之前都 ...

您好,我想问下活性电泳和非变性电泳在buffer 还有 燃料 还有电泳条件上有什么不同么?我查的都说是一个东西
13楼2013-10-31 16:26:54
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-10-31 19:19:28
那你做过的那个实验到底是怎么做的,为什么不展示出来?不展示出来就不知道怎么改进。...

发酵液 10000R 8MIN 取上清,然后0.22微米的滤器过滤上清液,根据上清的量确定盐析所用硫酸铵的量(百分之五十),4℃ 过夜,8000r 10min 上清单独收集 0.02摩尔的ph 7.4tris缓冲液溶解所得的沉淀,现在就是要验证这些组分- -
15楼2013-10-31 23:29:31
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