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benedictchau

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[交流] 关于发酵液中蛋白提取已有2人参与

大牛们，小弟研一刚做了一株菌，老板想让我分析一下它的抑菌物质具体成分，
跑过活性电泳有带但是回收后感觉没有抑菌活性了- -
大家还有什么好的建议么？
我想先看看这个到底是不是蛋白质

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1楼2013-10-25 10:24:29

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引用回帖:

9楼: Originally posted by benedictchau at 2013-10-30 08:27:49
我想问一下3K的滤膜超滤之后得到的滤液一部分沸水浴 10min 另一部分保持原样牛津杯法测量若煮沸的没有抑菌圈能说明抑菌物质是蛋白质么 3K与蛋白质分子量单位如何转化啊？跪谢...

可以是可以，但是你的这个物质最好是能定量，确切知道进行了某一个处理之后能够保留多少。牛津杯法不知道能不能精确定量，这个方法挺麻烦的。

处理方法不宜一下子就进行两个，比如超滤和煮沸这两个，如果之前都不知道每一个方法的效果，结合起来就更加说不清了。哪一步处理之后有多纯，回收多少，最怕就是糊里糊涂的做，做完之后也还是糊里糊涂。

为什么要一开始就确定是不是蛋白质？假如是几个氨基酸残基的寡肽，没有二级结构的，即使是煮沸也不会灭活的。而即使是蛋白质，也不一定就不能耐受萃取中的有机溶剂，就像是某些酶能耐受高浓度有机溶剂，例如：
Biochemical characterization of an extracellular polyextremophilic alpha-amylase from the halophilic archaeon Halorubrum xinjiangense有机溶剂.pdf
Effect of non aqueous solvent on structural stability of alpha-amylase A cost-effective prospective for protein stabilization有机溶剂.pdf
2012年有机溶剂 IF(2011)=1.683 Purification and characterization of an organic solvent-tolerant alkaline cellulase from a halophilic isolate of Thalassobacillus.pdf
2012年有机溶剂 IF(2011)=2.735 Purification and characterization of an organic-solvent-tolerant cellulase from a halotolerant isolate, Bacillus sp. L1.pdf

最好就是设计一些方案来分离，按照分离效果来一步步减少杂质，最终得到纯品，这下子再鉴定就完全明白了，在此之前的都只能是猜测。别偷懒，在等待的时间里可以同时尝试，不要等菌长的时候就去看PPS。

你的这句“跑过活性电泳有带但是回收后感觉没有抑菌活性了”是什么意思？“活性电泳”、“有带”、“回收”、“感觉”这四个词，我猜你的这个实验出了问题了，设计上或者操作上。活性电泳和非变性电泳是不同的，非变性电泳是保持非变性，但活性电泳不一定要保持非变性，只要能复性就行，而且要体现出活性。我猜你是跑了非变性电泳然后把蛋白质条带割下来回收了。这么做有一个前提，那就是这个物质肯定是蛋白质，而且能跑胶跑得出来，但其实这个物质还不一定是蛋白质。“感觉”这个词令我怀疑有没有准确定量。不管怎么说，还是把自己的实验步骤操作试剂分析放上来的好。