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考马斯亮蓝法测蛋白质,麻烦进来看一下吧
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做过考马斯亮蓝的各位大虫,帮我看看我哪里出错了吧。我连续过了两天多,标准曲线总是做不出来。 考马斯亮蓝溶液配制:考马斯亮蓝G―250 50mg溶于25mL 95%乙醇中,加入50mL 85%磷酸,用蒸馏水稀释至500mL。然后用0.45um滤膜过滤使用。溶液配好后还有一个问题,考马斯亮蓝加入乙醇磷酸后边砖红色,但是一旦加入水就变成蓝色了,这样的考马斯亮蓝溶液可以用吗? 蛋白质标准溶液配制:25mg牛血清白蛋白+250ml蒸馏水 定容,母液浓度为0.1mg/ml。 检测:分别取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml蛋白质溶液,分别加去离子水至1ml,然后加考马斯亮蓝各5ml。 结果:吸光度测了N遍,但结果大体都是1号到6号:0.622 0.654 0.719 0.609 0.546 0.729 (只选取一次检测结果) 我都郁闷了 不知道问题出在哪里。。。各位大神帮忙看看到底是哪里出了错吧!!!谢谢看完!有点长! |
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addison7805
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