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靳猫儿

银虫 (小有名气)

[求助] 考马斯亮蓝法测蛋白质,麻烦进来看一下吧

做过考马斯亮蓝的各位大虫,帮我看看我哪里出错了吧。我连续过了两天多,标准曲线总是做不出来。
考马斯亮蓝溶液配制:考马斯亮蓝G―250 50mg溶于25mL 95%乙醇中,加入50mL 85%磷酸,用蒸馏水稀释至500mL。然后用0.45um滤膜过滤使用。溶液配好后还有一个问题,考马斯亮蓝加入乙醇磷酸后边砖红色,但是一旦加入水就变成蓝色了,这样的考马斯亮蓝溶液可以用吗?
蛋白质标准溶液配制:25mg牛血清白蛋白+250ml蒸馏水 定容,母液浓度为0.1mg/ml。
检测:分别取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml蛋白质溶液,分别加去离子水至1ml,然后加考马斯亮蓝各5ml。
结果:吸光度测了N遍,但结果大体都是1号到6号:0.622 0.654 0.719 0.609 0.546 0.729  (只选取一次检测结果)   
我都郁闷了 不知道问题出在哪里。。。各位大神帮忙看看到底是哪里出了错吧!!!谢谢看完!有点长!
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080250028

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


xuweimbf: 金币+1, 积极应助。 2013-11-12 08:04:35
引用回帖:
2楼: Originally posted by vs570588 at 2013-10-23 00:03:16
帮你顶顶

是在595nm测的吗?我也是这样测得,是一条直线。考马斯在乙醇中溶解,加磷酸最后定容混匀,滤纸过滤。 是不是你的蛋白有问题?
3楼2013-11-11 22:07:37
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addison7805

金虫 (小有名气)

考马斯有试剂盒的,不用自己配溶液,那个准些,测不好的话,就买那个吧,也不贵。
4楼2013-11-12 10:07:39
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