| 查看: 3987 | 回复: 10 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[求助]
急~~~！！！sds-page电泳，重复了n次，都是这种死样子！ 已有1人参与
|
|||||
|
一跑就散了，而且各泳道都扩散到一起去了！！！而且整个过程中都跑的不整齐，不是一条线的那种。我这次特地把maker点在中间了，是不是真的是我样品问题啊，而且感觉跑的比较快。已经重复n次了，累死不说，心都哇凉哇凉的，求各位大神帮助啊~！ 我提蛋白用的成分是7M尿素 2M硫脲 2% tritonx-100 蛋白酶抑制剂 50mM DTT 提取之后我稀释定量，基本上都在2g/L左右的。然后直接上样。求大神指教如何处理样品，求~~~  DSC_0634.jpg  DSC_0633.jpg [ Last edited by 一苇杭之xmc on 2013-10-22 at 16:30 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有110人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS-PAGE电泳marker和样品的条带是歪的
已经有12人回复
- SDS-PAGE电泳图这样算成功吗？
已经有13人回复
- SDS-PAGE电泳图条带分析
已经有19人回复
- SDS-PAGE电泳样品及MARKER跑不开
已经有6人回复
- SDS——PAGE电泳槽
已经有4人回复
- SDS-PAGE 电泳时蛋白样品下不去什么原因？
已经有7人回复
- SDS-page电泳蛋白样的处理
已经有4人回复
- SDS-PAGE电泳，什么原因导致这种。有图有真相。谢谢各位给出宝贵意见！
已经有19人回复
- 蛋白质sds-page电泳图分析
已经有24人回复
- SDS-Page电泳没有条带，都是黑黑的一片，请教原因
已经有9人回复
- SDS-PAGE超低分子量电泳实验
已经有6人回复
- 关于SDS-PAGE电泳问题
已经有12人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳
已经有23人回复
- SDS-PAGE电泳遇到的问题
已经有26人回复
- SDS-PAGE电泳求助
已经有13人回复
- SDS-PAGE电泳溴酚蓝前沿线和样品带在一条线上是什么原因啊。
已经有14人回复
- 【求助】SDS-PAGE电泳上样量
已经有6人回复
- 【求助/交流】请问：sds-page都用哪种类型的电泳仪？
已经有14人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE电泳试剂厂家及价格
已经有9人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-24 12:25:10
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-24 12:25:10
|
SDS电泳带弥散和拖尾的原因和改进措施(2013-10-7) 1.原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15µL（即2-10µg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100µL。 2.原因二：样品溶解不完全。 对策： （1）样品应该充分溶解：保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。 (2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液；如果是自行配置标准和未知样品，按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后，将其转移至Eppendorf管，盖上盖子（可以在盖子处加上卡子）后在110度沸水中水浴加热3分钟（可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞，Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中，薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面，便于取用和加热，也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中，盖子可能会被冲开），而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用，则将样品放入零下20度冰箱中储存，需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样，以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。 （3）改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解，SDS 用量要充分。 SDS电泳带变宽的原因和改进措施(2013-10-7) 除了以上两条原因外，还有： 原因三：SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连。除了上样量过多和样品溶解不完全外，凝胶的加样孔泄露会使得电泳带变宽。加样孔泄露往往由于凝胶与玻璃板之间产生裂纹引起。对策：此时只能重新制备凝胶，梳子拔起时要小心等凝胶凝聚完毕，速度不宜过快，拔起的方向要垂直于凝胶表面；要避免凝胶两侧的玻璃板与凝胶之间产生裂纹，在凝胶制备过程中不要挤压凝胶两侧的玻璃板。 |
8楼2013-10-23 11:23:31
同东中郎将
新虫 (小有名气)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 318.1
- 帖子: 99
- 在线: 34.3小时
- 虫号: 2417234
- 注册: 2013-04-14
- 性别: GG
- 专业: 作物栽培与耕作学
2楼2013-10-22 17:14:02
3楼2013-10-22 17:32:32
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-23 10:39:55
gyesang: 金币+5, 欢迎老版主常来！ 2013-10-24 12:24:18
gyesang: 回帖置顶 2013-10-24 12:24:21
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-23 10:39:55
gyesang: 金币+5, 欢迎老版主常来！ 2013-10-24 12:24:18
gyesang: 回帖置顶 2013-10-24 12:24:21
|
给你个SDS-PAGE“耻辱堂”，自己对照下看看吧 http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/sdsgoofs.html |
4楼2013-10-22 20:35:58
