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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)

[求助] 急~~~！！！sds-page电泳，重复了n次，都是这种死样子！ 已有1人参与

一跑就散了，而且各泳道都扩散到一起去了！！！而且整个过程中都跑的不整齐，不是一条线的那种。我这次特地把maker点在中间了，是不是真的是我样品问题啊，而且感觉跑的比较快。已经重复n次了，累死不说，心都哇凉哇凉的，求各位大神帮助啊~！
我提蛋白用的成分是7M尿素 2M硫脲 2% tritonx-100 蛋白酶抑制剂 50mM DTT
提取之后我稀释定量，基本上都在2g/L左右的。然后直接上样。求大神指教如何处理样品，求~~~
急~~~！！！sds-page电泳，重复了n次，都是这种死样子！
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急~~~！！！sds-page电泳，重复了n次，都是这种死样子！-1
DSC_0633.jpg

[ Last edited by 一苇杭之xmc on 2013-10-22 at 16:30 ]
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欲速则不达
1楼 2013-10-22 16:27:40
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woai43

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-10-23 08:34:20
应该是尿素和硫脲的问题，我之前用尿素纯化his标签蛋白sds-page就跟你这个差不多。Maker是被两侧蛋白挤到了所以上面宽下面窄。你可以尝试把样品透析降低尿素试试看
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7楼2013-10-23 08:12:01
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-10-22 18:26:21
1，检测一下你的电泳槽是否漏液。
2，每个样品间间隔一个空白，试一下。
3，你的上样量是多少？感觉样品没多少蛋白。
4，脱色脱的时间短，看不清。
赞一下 回复此楼
曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
2楼2013-10-22 17:14:02
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一苇杭之xmc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-10-22 17:14:02
1，检测一下你的电泳槽是否漏液。
2，每个样品间间隔一个空白，试一下。
3，你的上样量是多少？感觉样品没多少蛋白。
4，脱色脱的时间短，看不清。

电泳槽漏液的话是不是装的时候没装紧啊~我用bradford法定量出来的浓度有1~2g/L左右，上样量是25微升。其实我试过好几次了，每次提取样品都跑出来是这样，各个泳道都连到一起了。。。marker跑的都没什么问题，脱色是我今天实在是太沮丧了，脱到这样懒得往下做了。
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欲速则不达
3楼2013-10-22 17:32:32
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-23 10:39:55
gyesang: 金币+5, 欢迎老版主常来！ 2013-10-24 12:24:18
gyesang: 回帖置顶 2013-10-24 12:24:21
给你个SDS-PAGE“耻辱堂”，自己对照下看看吧
http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/sdsgoofs.html
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4楼2013-10-22 20:35:58
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