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mrchen8903

铜虫 (初入文坛)

[求助] 25ulPCR体系

谁能分享我一个25ulPCR体系的优化参数吗?怎么感觉有些50uL说明书上的减半做不出来
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sv50

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mrchen8903(amisking代发): 金币+2, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-10-22 18:26:46
using Takara Ex Taq,  follow their recommended protocol.

Takara Ex Taq™ DNA Polymerase (5 U/μL)                        0.125 μL
10X Buffer (20 mM Mg2+ plus)                        2.5 μL
dNTP Mix (2.5 mM each)                        2.0 μL
DNA template                                1 μL (2-200 ng)
Primer 1 (5 µM stock)                                1 μL
Primer 2 (5 µM stock)                                1 μL
Sterile ddH20                                                  17.375 μL
Total volume                                                                   25 μL

希望有帮助
2楼2013-10-22 16:43:56
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黑盖儿

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流! 2013-10-22 18:26:53
酶 1ul
buffer 2ul
模板 1ul
引物 各3ul
ddH2O 10ul
dNTP 5ul
如果基因序列中G+C含量较高,则可适量加一点DMSO(ddH2O可以少加2ul)
我给不了你宝马香车,锦衣玉食,但我会用一辈子去疼你,爱你,保护你
3楼2013-10-22 17:01:14
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