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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定量PCR结果分析
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guid

新虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR结果分析

我在做荧光定量PCR时，为了观察某个目的基因在处理前后的变化情况，因为两个内参去计算2-^^Ct值，结果基因变化情况正好相反。遇到这种情况我应该怎么去处理啊？求处理方法。在线等！！
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1楼 2013-10-15 14:55:03
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taccycle

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你去查一查文献，看看大家都用哪些内参，你这个情况显然是两个内参有一个表达量不稳定，
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用心
2楼2013-10-16 16:44:49
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guid

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by taccycle at 2013-10-16 16:44:49
你去查一查文献，看看大家都用哪些内参，你这个情况显然是两个内参有一个表达量不稳定，

做动物细胞总蛋白的内参 貌似b-actin 和b-tubulin是都可以的 我分别用着两个内参做定量 根据不同的内参去计算 我的目的基因的变化就差异很大了
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3楼2013-10-20 20:45:34
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taccycle

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-21 10:10:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by guid at 2013-10-20 20:45:34
做动物细胞总蛋白的内参 貌似b-actin 和b-tubulin是都可以的 我分别用着两个内参做定量 根据不同的内参去计算 我的目的基因的变化就差异很大了...

你要根据你的样本是什么组织和处理时什么类型来选内参，比如不同的组织对待同样的处理内参可能就不稳定了，你看看别人的文献中研究你这种组织中的这个基因用这种处理方法时用的什么内参，你说的那两个内参都是一种通用内参，其实不具有通用的意义，就是大家滥用的，你可以根据你的研究类型自己选出来一些试用的内参，比如玩意你研究的那种处理方法正好会影响细胞骨架的形成，那你还选用b-actin 和b-tubulin做内参肯定不行了，常用的内参还有GAPDH，18sRNA
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用心
4楼2013-10-21 09:28:20
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