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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒连接问题
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fengbing1116

金虫 (初入文坛)

[求助] 质粒连接问题

我在做载体构建，PUC19上连了一个片段，精提质粒验证，PCR验证，双酶切验证都正确，为什么单酶切出现好几条带呢？注，单酶切在质粒上只有一个酶切位点。
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幸福就是一种心态~
1楼 2013-10-13 19:25:27
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黑盖儿

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-18 02:27:41
不知你回收的时候条带亮度怎样？如果很亮的话建议你稍微增加一点限制性内切酶的用量，并适当延长时间。再就是检查一下你的限制性内切酶在公用buffer中的活性怎样，如果两种酶在公用buffer中活性相差很大，会出现一个酶切位点已经完全切开，而另一个酶切位点却没有完全切开，这样就会出现多条条带。
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我给不了你宝马香车，锦衣玉食，但我会用一辈子去疼你，爱你，保护你
10楼2013-10-17 11:45:56
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chaorenxmc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-14 08:28:07
单酶切的图呢，跑胶用没有酶切的原质粒作对照了吗，有可能单酶切没切开
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2楼2013-10-13 19:40:51
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xiaozhu20131

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-14 08:28:02
连了一个片段?这一段内可能有酶切位点。。。
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面对现实，只有努力。。。
3楼2013-10-13 20:13:13
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wcfbio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-14 08:27:58
酶切验证是不好做的，有时候就出现特别情况，是否你的载体上，或者目的片段上有酶切位点，这个你一定要细心，实在不行拿出去测序分析。
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对于誓言一定要实现。
4楼2013-10-13 23:20:50
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