24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1667  |  回复: 12

doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] DGGE银染问题 已有1人参与

我的DGGE胶用银染方法染色,背景很干净,但是泳道颜色很深,有什么方法可以让用淡颜色淡点吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-28 15:25:58
现在我还在纠结中呢, 您说的是显影时甲醛的用量吗?可不可以把你染色的配方及方法发给我,谢谢!!
...

试剂配方
10% HAC             50ml HAC(冰醋酸)+450ml dH2O
1%硝酸               5ml 硝酸+495ml dH2O
0.2%硝酸银            1g硝酸银+500ml dH2O+500ul甲醛
2.5%碳酸钠           12.5g碳酸钠+250ul甲醛+500ml dH2O

步骤
a、小心将胶卸下,留在大板上
b、放入500ml 10%乙酸中摇晃20min固定
c、小心将胶取出,将盆洗净
d、放入500ml 1%硝酸溶液中摇晃固定10分钟
e、500ml蒸馏水洗三次,摇晃
f、加入500ml 0.2%硝酸银溶液,温室中黑暗摇晃20-30分钟
g、取出胶用500ml蒸馏水洗涤10秒
h、加入2.5%预冷的碳酸钠溶液摇晃条带显出
i、用蒸馏水清洗,拍照
备注: e步骤第二次水洗一定要超过5分钟,这样胶不易碎,其他两次随意
g步骤,先用水洗一次,10s
把水倒掉,在洗一次,15-20s,这样背景就不会很黑
12楼2014-02-28 20:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-13 19:39:02
泳道颜色深可能是前期PCR的原因,出现非特异扩增~
如果不是,可能是染色出现问题,可能是银染之后水洗的时间不够~
2楼2013-10-13 10:52:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhf903 at 2013-10-13 10:52:32
泳道颜色深可能是前期PCR的原因,出现非特异扩增~
如果不是,可能是染色出现问题,可能是银染之后水洗的时间不够~

银染后水洗六次了,还是一样,可能是产物问题,只是不知道该怎么解决?有什么办法吗?
3楼2013-10-14 18:25:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-14 20:50:27
可以试试用PCR产物纯化试剂盒,上样前在按一定比例混和loading buffer
4楼2013-10-14 19:01:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lhf903 at 2013-10-14 19:01:45
可以试试用PCR产物纯化试剂盒,上样前在按一定比例混和loading buffer

恩恩,我也正有此意,再问下,纯化试剂盒哪个牌子的比较好
5楼2013-10-16 20:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱吃鱼l

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗,是那一步骤出的问题,我现在做DGGE也遇到这问题了,不知怎么解决呢?还请楼主赐教,拜谢!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2014-02-20 21:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-20 21:58:15
请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗,是那一步骤出的问题,我现在做DGGE也遇到这问题了,不知怎么解决呢?还请楼主赐教,拜谢!

我可能是甲醛加多了,后面减少就好了
7楼2014-02-28 10:06:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-20 21:58:15
请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗,是那一步骤出的问题,我现在做DGGE也遇到这问题了,不知怎么解决呢?还请楼主赐教,拜谢!

我可能是甲醛加多了,后面减少就好了
8楼2014-02-28 10:06:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-20 21:58:15
请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗,是那一步骤出的问题,我现在做DGGE也遇到这问题了,不知怎么解决呢?还请楼主赐教,拜谢!

我可能是甲醛加多了,后面减少就好了
9楼2014-02-28 10:06:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-20 21:58:15
请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗,是那一步骤出的问题,我现在做DGGE也遇到这问题了,不知怎么解决呢?还请楼主赐教,拜谢!

我可能是甲醛加多了,后面减少就好了
10楼2014-02-28 10:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 doubleping 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +7 素年祭语 2026-04-06 10/500 2026-04-06 23:31 by 素年祭语
[考研] 一志愿郑州大学085600求调剂 +19 吃的不少 2026-04-05 22/1100 2026-04-06 22:39 by tianyyysss
[考研] 08600生物与医药-327 +9 18755400796 2026-04-05 9/450 2026-04-06 22:35 by 52305043001
[考研] 材料与化工363求推荐 +11 zh096 2026-04-04 11/550 2026-04-06 19:14 by guanxin1001
[考研] 324求调剂 +3 k可乐 2026-04-05 4/200 2026-04-06 09:54 by 蓝云思雨
[考研] 272分求调剂 +4 wangyile2233 2026-04-02 4/200 2026-04-05 22:21 by 286640313
[考研] 本科211,293分请求调剂 +8 莲菜就是藕吧 2026-04-03 9/450 2026-04-05 19:12 by 蓝云思雨
[考研] 22408 总分320,一篇论文二作,两个国三,求调剂 +3 Leomulufu 2026-04-04 5/250 2026-04-05 19:04 by chongya
[考研] 301求调剂 +18 骆驼男人 2026-04-02 18/900 2026-04-04 20:33 by 蓝云思雨
[考研] 085601,一志愿厦大334复试被刷求调剂 +13 曾仰之 2026-04-03 15/750 2026-04-04 20:13 by dongzh2009
[考研] 321求调剂 +13 认真求上学 2026-04-02 13/650 2026-04-04 18:23 by macy2011
[考研] 一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂 +3 zxt11111 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:21 by 土木硕士招生
[考研] 309求调剂 +6 刘刘刘1231 2026-04-02 7/350 2026-04-04 13:41 by liucky
[考研] 总分328生物与医药考数学求调剂 +7 aaadim 2026-04-02 9/450 2026-04-03 22:53 by syh9288
[考研] 建环,能源,土木老师路过看一看!!! +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 交通运输考试264分求工科调剂 +4 jike777 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:53 by zllcz
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考研] 生物与医药考研调剂 +5 铁憨憨123425 2026-03-31 5/250 2026-04-01 18:01 by syh9288
[考研] 085601英二数二求调剂 总分325 +4 余航航 2026-03-31 4/200 2026-03-31 17:38 by 唐沐儿
信息提示
请填处理意见