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爱吃鱼l

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10楼: Originally posted by doubleping at 2014-02-28 10:07:05
我可能是甲醛加多了，后面减少就好了...

现在我还在纠结中呢，您说的是显影时甲醛的用量吗？可不可以把你染色的配方及方法发给我，谢谢！！

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11楼2014-02-28 15:25:58

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doubleping

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

11楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-28 15:25:58
现在我还在纠结中呢，您说的是显影时甲醛的用量吗？可不可以把你染色的配方及方法发给我，谢谢！！
...

试剂配方
10% HAC          50ml HAC（冰醋酸）+450ml dH2O
1%硝酸             5ml 硝酸+495ml dH2O
0.2%硝酸银          1g硝酸银+500ml dH2O+500ul甲醛
2.5%碳酸钠          12.5g碳酸钠+250ul甲醛+500ml dH2O

步骤
a、小心将胶卸下，留在大板上
b、放入500ml 10%乙酸中摇晃20min固定
c、小心将胶取出，将盆洗净
d、放入500ml 1%硝酸溶液中摇晃固定10分钟
e、500ml蒸馏水洗三次，摇晃
f、加入500ml 0.2%硝酸银溶液，温室中黑暗摇晃20-30分钟
g、取出胶用500ml蒸馏水洗涤10秒
h、加入2.5%预冷的碳酸钠溶液摇晃条带显出
i、用蒸馏水清洗，拍照
备注: e步骤第二次水洗一定要超过5分钟，这样胶不易碎，其他两次随意
g步骤，先用水洗一次，10s
把水倒掉，在洗一次，15-20s，这样背景就不会很黑

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12楼2014-02-28 20:54:17

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爱吃鱼l

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引用回帖:

12楼: Originally posted by doubleping at 2014-02-28 20:54:17
试剂配方
10% HAC          50ml HAC（冰醋酸）+450ml dH2O
1%硝酸             5ml 硝酸+495ml dH2O
0.2%硝酸银          1g硝酸银+500ml dH2O+500ul甲醛
2.5%碳酸钠          12.5g碳酸钠+250ul甲醛 ...

谢谢！我发现pcr产物的质量对后面DGGE影响挺大的，比如说-pcr产物电泳时显示的微弱的非特异性产物，不知楼主是否做过相关方面的摸索？

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13楼2014-03-01 09:30:33

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