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doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] DGGE银染问题 已有1人参与

我的DGGE胶用银染方法染色,背景很干净,但是泳道颜色很深,有什么方法可以让用淡颜色淡点吗?
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-28 15:25:58
现在我还在纠结中呢, 您说的是显影时甲醛的用量吗?可不可以把你染色的配方及方法发给我,谢谢!!
...

试剂配方
10% HAC             50ml HAC(冰醋酸)+450ml dH2O
1%硝酸               5ml 硝酸+495ml dH2O
0.2%硝酸银            1g硝酸银+500ml dH2O+500ul甲醛
2.5%碳酸钠           12.5g碳酸钠+250ul甲醛+500ml dH2O

步骤
a、小心将胶卸下,留在大板上
b、放入500ml 10%乙酸中摇晃20min固定
c、小心将胶取出,将盆洗净
d、放入500ml 1%硝酸溶液中摇晃固定10分钟
e、500ml蒸馏水洗三次,摇晃
f、加入500ml 0.2%硝酸银溶液,温室中黑暗摇晃20-30分钟
g、取出胶用500ml蒸馏水洗涤10秒
h、加入2.5%预冷的碳酸钠溶液摇晃条带显出
i、用蒸馏水清洗,拍照
备注: e步骤第二次水洗一定要超过5分钟,这样胶不易碎,其他两次随意
g步骤,先用水洗一次,10s
把水倒掉,在洗一次,15-20s,这样背景就不会很黑
12楼2014-02-28 20:54:17
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-13 19:39:02
泳道颜色深可能是前期PCR的原因,出现非特异扩增~
如果不是,可能是染色出现问题,可能是银染之后水洗的时间不够~
2楼2013-10-13 10:52:32
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doubleping

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhf903 at 2013-10-13 10:52:32
泳道颜色深可能是前期PCR的原因,出现非特异扩增~
如果不是,可能是染色出现问题,可能是银染之后水洗的时间不够~

银染后水洗六次了,还是一样,可能是产物问题,只是不知道该怎么解决?有什么办法吗?
3楼2013-10-14 18:25:58
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-14 20:50:27
可以试试用PCR产物纯化试剂盒,上样前在按一定比例混和loading buffer
4楼2013-10-14 19:01:45
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