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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » ＤＧＧＥ银染问题
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doubleping

新虫 (小有名气)

[求助] ＤＧＧＥ银染问题 已有1人参与

我的ＤＧＧＥ胶用银染方法染色，背景很干净，但是泳道颜色很深，有什么方法可以让用淡颜色淡点吗？
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1楼 2013-10-13 09:11:26
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-28 15:25:58
现在我还在纠结中呢， 您说的是显影时甲醛的用量吗？可不可以把你染色的配方及方法发给我，谢谢！！
...

试剂配方
10% HAC             50ml HAC（冰醋酸）+450ml dH2O
1%硝酸               5ml 硝酸+495ml dH2O
0.2%硝酸银            1g硝酸银+500ml dH2O+500ul甲醛
2.5%碳酸钠           12.5g碳酸钠+250ul甲醛+500ml dH2O

步骤
a、小心将胶卸下，留在大板上
b、放入500ml 10%乙酸中摇晃20min固定
c、小心将胶取出，将盆洗净
d、放入500ml 1%硝酸溶液中摇晃固定10分钟
e、500ml蒸馏水洗三次，摇晃
f、加入500ml 0.2%硝酸银溶液，温室中黑暗摇晃20-30分钟
g、取出胶用500ml蒸馏水洗涤10秒
h、加入2.5%预冷的碳酸钠溶液摇晃条带显出
i、用蒸馏水清洗，拍照
备注: e步骤第二次水洗一定要超过5分钟，这样胶不易碎，其他两次随意
g步骤，先用水洗一次，10s
把水倒掉，在洗一次，15-20s，这样背景就不会很黑
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12楼2014-02-28 20:54:17
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-13 19:39:02
泳道颜色深可能是前期PCR的原因，出现非特异扩增~
如果不是，可能是染色出现问题，可能是银染之后水洗的时间不够~
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2楼2013-10-13 10:52:32
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lhf903 at 2013-10-13 10:52:32
泳道颜色深可能是前期PCR的原因，出现非特异扩增~
如果不是，可能是染色出现问题，可能是银染之后水洗的时间不够~

银染后水洗六次了，还是一样，可能是产物问题，只是不知道该怎么解决？有什么办法吗？
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3楼2013-10-14 18:25:58
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-14 20:50:27
可以试试用PCR产物纯化试剂盒，上样前在按一定比例混和loading buffer
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4楼2013-10-14 19:01:45
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lhf903 at 2013-10-14 19:01:45
可以试试用PCR产物纯化试剂盒，上样前在按一定比例混和loading buffer

恩恩，我也正有此意，再问下，纯化试剂盒哪个牌子的比较好
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5楼2013-10-16 20:53:04
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爱吃鱼l

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗，是那一步骤出的问题，我现在做DGGE也遇到这问题了，不知怎么解决呢？还请楼主赐教，拜谢！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-02-20 21:58:15
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-20 21:58:15
请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗，是那一步骤出的问题，我现在做DGGE也遇到这问题了，不知怎么解决呢？还请楼主赐教，拜谢！

我可能是甲醛加多了，后面减少就好了
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7楼2014-02-28 10:06:12
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-20 21:58:15
请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗，是那一步骤出的问题，我现在做DGGE也遇到这问题了，不知怎么解决呢？还请楼主赐教，拜谢！

我可能是甲醛加多了，后面减少就好了
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8楼2014-02-28 10:06:45
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-20 21:58:15
请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗，是那一步骤出的问题，我现在做DGGE也遇到这问题了，不知怎么解决呢？还请楼主赐教，拜谢！

我可能是甲醛加多了，后面减少就好了
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9楼2014-02-28 10:06:55
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doubleping

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 爱吃鱼l at 2014-02-20 21:58:15
请问你DGGE背景色暗的问题解决了吗，是那一步骤出的问题，我现在做DGGE也遇到这问题了，不知怎么解决呢？还请楼主赐教，拜谢！

我可能是甲醛加多了，后面减少就好了
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10楼2014-02-28 10:07:05
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