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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于一个MTT毒性试验的问题
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河水流云

木虫 (正式写手)

[求助] 关于一个MTT毒性试验的问题

各位生物界大神，本人生物小白最近要做一个细胞毒性试验，是检测纳米颗粒的毒性的，我需要做一个时间对照试验，24h、48h、72h、96h和120h。我看了MTT试验的操作过程，一般是细胞培养好之后再加入到96孔板里面再加颗粒培养，然后加MTT检测。我想问的是，比如我做120小时的那个组，我在这个检测过程中细胞会长满需要传代，这我是按照正常的方式胰酶处理然后继续加培养基培育吗？这不会对最终的结果带来影响吗，而且我一开始加入颗粒，在我换培养液之后还需要重新加颗粒吗，如果要加这不也是会产生影响吗？如果不用传代的话细胞由于空间变小导致死亡这结果也是不准确的啊!
恳请个位大虾帮助小白啊，小白不甚感激！！！
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1楼 2013-10-12 16:32:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

helen112233

木虫 (正式写手)
72小时在论文里面见过，96小时貌似很少见（个人没什么印象），120小时太夸张了吧？！
建议楼主应该多看点论文， 看看比人论文怎么做的，目前个人还没有看到120小时的，不用点板，直接在培养瓶里，细胞留少少的，120小时不换液试试。
MTT 如果留的细胞太少的话，养的时间长了，不同孔之间细胞个数的差异被放大，实验很难有说服性的。
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河水流云
7楼2013-10-14 21:23:55
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普通回帖

feilinshiji

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
河水流云: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-10-13 16:06:22
把高血清浓度的生长液，换成低浓度的维持液就行
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2楼2013-10-12 21:31:32
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河水流云

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by feilinshiji at 2013-10-12 21:31:32
把高血清浓度的生长液，换成低浓度的维持液就行

我想再问您一下低浓度的维持液是将FBS的浓度降低吗，这个不同的细胞条件不同吧，这个量是需要自己摸索吗？我用的是HEK193人胚肾细胞 和BT-474乳腺癌细胞
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3楼2013-10-13 08:57:38
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feilinshiji

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 河水流云 at 2013-10-13 08:57:38
我想再问您一下低浓度的维持液是将FBS的浓度降低吗，这个不同的细胞条件不同吧，这个量是需要自己摸索吗？我用的是HEK193人胚肾细胞 和BT-474乳腺癌细胞...

对啊，一般生长液FBS浓度在10%，维持液可以降至2%，这个浓度不会使细胞大量增殖，而仅仅是维持其正常生理功能
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4楼2013-10-13 10:40:26
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feilinshiji

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 河水流云 at 2013-10-13 08:57:38
我想再问您一下低浓度的维持液是将FBS的浓度降低吗，这个不同的细胞条件不同吧，这个量是需要自己摸索吗？我用的是HEK193人胚肾细胞 和BT-474乳腺癌细胞...

补充一下，我不确定细胞种类不同会不会在FBS浓度要求上又差异，保险起见你还是摸索一下浓度吧
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5楼2013-10-13 10:42:19
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河水流云

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by feilinshiji at 2013-10-13 10:42:19
补充一下，我不确定细胞种类不同会不会在FBS浓度要求上又差异，保险起见你还是摸索一下浓度吧...

好的，谢谢大虾啦
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6楼2013-10-13 16:05:53
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河水流云

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by helen112233 at 2013-10-14 21:23:55
72小时在论文里面见过，96小时貌似很少见（个人没什么印象），120小时太夸张了吧？！
建议楼主应该多看点论文， 看看比人论文怎么做的，目前个人还没有看到120小时的，不用点板，直接在培养瓶里，细胞留少少的，12 ...

您好，这个试验我看文献一般也就在2天到3天这个范围，我举120小时只是想把我这个问题说的跟突出一点，不过我真的有看到120小时的，不过貌似就一篇，呵呵，谢谢您
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8楼2013-10-16 08:58:25
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0614after

金虫 (小有名气)
你是检测这些微粒的细胞毒性，我具体不知道你用的是什么细胞，我们这里用的是L929细胞，如果要做的话首先将你的微粒加入到培养基内，同时做空白对照、阳性对照、阴性对照好以及平行样，注意你的检测样品是放到培养基里面后成为阳性的，细胞铺板后培养24小时，然后将铺板时的培养液吸出，分别加入空白对照、阳性对照、阴性对照和样品的浸提液，培养2天后，就可以用MTT法检测OD值了。希望能够对你有帮助
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9楼2013-10-24 16:08:54
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河水流云

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 0614after at 2013-10-24 16:08:54
你是检测这些微粒的细胞毒性，我具体不知道你用的是什么细胞，我们这里用的是L929细胞，如果要做的话首先将你的微粒加入到培养基内，同时做空白对照、阳性对照、阴性对照好以及平行样，注意你的检测样品是放到培养基 ...

您好，我用的是MCF-7细胞，请问浸提液是什么东东？
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10楼2013-10-25 10:25:57
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