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求分枝杆菌基因组的提取方法
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3楼2013-10-04 11:07:23
LOVEMeisq
新虫 (初入文坛)
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- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wwdxx2004: 金币+1, ★有帮助, 谢谢！ 2013-10-04 11:06:16
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-04 11:07:27
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-04 11:07:27
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1.灭活的斜面加入2mlTE，取1ml，12 000rpm，5min，弃上清。 2.沉淀物加入565μl的TE缓冲液，吸管反复吹打使之重悬，置于-70℃冰箱中放置过夜。加入5μl蛋白酶K、30μl 10%SDS，混匀，于65℃温育>1h。 3.加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），混匀，12000rpm，5min，将上清液转入一只新管中。 4.加入0.6体积冰异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，-20℃静置20min，12000rpm，5min，弃上清。1ml的70%冰乙醇洗涤。 5.12000rpm，5min，弃上清，室温干燥，重溶于40μl的TE缓冲液。 这个是结核分枝杆菌的。 |
2楼2013-10-04 10:44:08
LOVEMeisq
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4楼2013-10-05 12:56:14
【答案】应助回帖
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细菌基因组DNA的制备 一、材料 细菌培养物。 二、设备 移液管, 高速冷冻离心机, 台式离心机，水浴锅。 三、试剂 1、CTAB/NaCl溶液：4.1g NaCl溶解于80ml H2 O,缓慢加入10g CTAB,加水至100ml。 2、其它试剂：氯仿:异戊醇(24:1)，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，异丙醇，70% 乙醇，TE，10% SDS，蛋白酶 K (20mg/ml或粉剂)，5mol/L NaCl。 四、操作步骤： 1. 100ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 去上清液。 2. 加9.5ml TE悬浮沉淀, 并加0.5ml 10% SDS, 50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶 K, 混匀, 37℃保温1小时。 3. 加1.5ml 5mol/L NaCl, 混匀。 4. 加1.5ml CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65℃保温20分钟。 5. 用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管。 6. 用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至干净管中。 7. 加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟，沉淀DNA。 8. 用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1ml TE, -20℃保存。如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。 9. 如要除去其中的RNA, 可以按本章第三节中操作步骤处理。 来自：百博明创（北京） |
5楼2013-10-16 09:52:09
