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CS—园艺

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 19
帖子: 16
在线: 3.8小时
虫号: 2557607

[交流] PCR的操作应注意什么？

做了几次PCR都做不出来，RT—PCR做不出来，当我尝试用DNA做PCR的时候可以做出来了，但之后做DNA PCR由做不出来了，试剂是没有问题的。我整个过程在冰浴上做，会不会是这里出了问题？

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1楼 2013-09-29 09:49:02

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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 17 (小学生)
金币: 1088.2
帖子: 954
在线: 124.3小时
虫号: 1255578

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-29 20:24:46

做RT—PCR做不出来，用DNA做PCR的时候可以做出来了，说明极可能你反转录有问题，即cDNA模版有问题，但之后做DNA PCR也做不出来了，若试剂是没有问题，试剂没有加错，反应条件各个方面都行，那么说明可能你的引物或模版出问题了

8楼2013-09-29 16:40:55

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查看全部 9 个回答

CS—园艺

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 19
帖子: 16
在线: 3.8小时
虫号: 2557607

试剂剂量
无菌水 39μl
10×buffer 5 μl
dNTP（10mmol/L） 1 μl
引物ALF171697 1 μl
引物ALF171698 1 μl
CDNA 2 μl
B Taq酶（含Mg2+） 1 μl
总和
50 μl

赞一下(1人)

3楼2013-09-29 10:06:12

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feilinshiji

银虫 (小有名气)

应助: 24 (小学生)
金币: 336.9
帖子: 99
在线: 33.5小时
虫号: 1112545

★ ★
CS—园艺(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-29 19:51:15

亲，影响PCR的因素太多了，比如引物的设计、模板的提取、反应条件的设置等等，你说的太笼统了，没法确定究竟是哪儿出了问题

4楼2013-09-29 10:49:03

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北极胖熊

新虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 18.4
帖子: 143
在线: 40.6小时
虫号: 2685710

★ ★
CS—园艺(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-29 20:24:34

cDNA电泳一下看是否有东西,试剂没问题,引物没问题肯定就是模板有问题

6楼2013-09-29 15:20:01

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简单回复

求不重复2楼

2013-09-29 09:53 回复

CS—园艺(金币+1): 谢谢参与
缩++影: 金币-1, 专业版块请认真回答问题，谢绝灌水，谢谢合作！ 2013-09-29 10:11:18

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