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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 谁做过大肠杆菌电转化的，进来交流下经验呀。
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15879003030

铜虫 (小有名气)

[交流] 谁做过大肠杆菌电转化的，进来交流下经验呀。

本人用的大肠杆菌电转化感受态是自制的，1mm的bio-rad电击杯，1.5KV 25uF 200欧，
个人电击的经验是：电击杯里加的感受态体积小于50，或者+链接产物10uL的话，电击时很容易电出火花，或者说是爆杯，转质粒或者体积大一些则比较正常（1mm的电击杯）  不知道大家有没有这方面的经验，什么条件什么体积的感受态加到电击杯里效率比较高一些。对感受态浓度有没有什么要求呢？

[ Last edited by 15879003030 on 2013-9-18 at 20:34 ]
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1楼 2013-09-18 20:27:00
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-19 13:48:40
15879003030: 金币+4 2013-09-20 09:04:06
一般加个1ul差不多了，加10ul要用新过一次小柱子，水洗。
大部分连接用不着电转吧，电转明显没有热激稳定。
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4楼2013-09-19 00:12:44
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 的确，盐离子浓度太高 2013-09-19 13:48:32
—怎么可能加连接产物10ul？   里面全是离子啊。
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2楼2013-09-18 20:50:25
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15879003030

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-09-18 20:50:25
—怎么可能加连接产物10ul？   里面全是离子啊。

一般最多加多少链接产物呢。
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3楼2013-09-18 21:03:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-19 13:48:47
15879003030: 金币+3 2013-09-20 09:04:00
一般是40μl感受态，加1-2μl的连接产物。连接产物体积不超过5%。
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5楼2013-09-19 00:58:27
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