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[交流]
谁做过大肠杆菌电转化的，进来交流下经验呀。
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本人用的大肠杆菌电转化感受态是自制的，1mm的bio-rad电击杯，1.5KV 25uF 200欧， 个人电击的经验是：电击杯里加的感受态体积小于50，或者+链接产物10uL的话，电击时很容易电出火花，或者说是爆杯，转质粒或者体积大一些则比较正常（1mm的电击杯） 不知道大家有没有这方面的经验，什么条件什么体积的感受态加到电击杯里效率比较高一些。对感受态浓度有没有什么要求呢？ [ Last edited by 15879003030 on 2013-9-18 at 20:34 ] |
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 分子生化实验经验积累 |
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15879003030: 金币+3 2013-09-22 13:42:25
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15879003030: 金币+3 2013-09-22 13:42:25
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1 电击杯的准备很重要。把电击杯用蒸馏水冲洗，然后再用75%的乙醇冲洗，电击杯倒置在超净工作台中，紫外灯照射和风吹20分钟左右；把电击杯放到冰盒中，用冰埋至电击杯的塑料处，继续吹半小时。 2 自己制作的电转感受态细胞，一定要用冰冷的去离子水多洗几次，防止电弧的产生。 3 连接产物一定要沉淀，去除里面的离子，防止电弧的产生。量最好在1-2微升之间。 4 不要让电击杯内的溶液产生气泡，加入感受态和连接产物后轻轻的在桌子上磕磕电击杯，防止起泡的产生。 5 整个过程不要太慢。控制在一分钟内。 |
10楼2013-09-22 10:57:05
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