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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 谁做过大肠杆菌电转化的，进来交流下经验呀。
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15879003030

铜虫 (小有名气)

[交流] 谁做过大肠杆菌电转化的，进来交流下经验呀。

本人用的大肠杆菌电转化感受态是自制的，1mm的bio-rad电击杯，1.5KV 25uF 200欧，
个人电击的经验是：电击杯里加的感受态体积小于50，或者+链接产物10uL的话，电击时很容易电出火花，或者说是爆杯，转质粒或者体积大一些则比较正常（1mm的电击杯）  不知道大家有没有这方面的经验，什么条件什么体积的感受态加到电击杯里效率比较高一些。对感受态浓度有没有什么要求呢？

[ Last edited by 15879003030 on 2013-9-18 at 20:34 ]
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1楼 2013-09-18 20:27:00
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 的确，盐离子浓度太高 2013-09-19 13:48:32
—怎么可能加连接产物10ul？   里面全是离子啊。
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2楼2013-09-18 20:50:25
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15879003030

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-09-18 20:50:25
—怎么可能加连接产物10ul？   里面全是离子啊。

一般最多加多少链接产物呢。
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3楼2013-09-18 21:03:36
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-19 13:48:40
15879003030: 金币+4 2013-09-20 09:04:06
一般加个1ul差不多了，加10ul要用新过一次小柱子，水洗。
大部分连接用不着电转吧，电转明显没有热激稳定。
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4楼2013-09-19 00:12:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-19 13:48:47
15879003030: 金币+3 2013-09-20 09:04:00
一般是40μl感受态，加1-2μl的连接产物。连接产物体积不超过5%。
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5楼2013-09-19 00:58:27
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
6楼2013-09-19 10:36:52
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caolichuang

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-19 13:48:54
另外电压是不是有点高   一般不是12500v/cm么比较保险   我们用的是2500v/2mm，100ul感受态，10ul连接产物没问题 只是要过柱或者洗过都行
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7楼2013-09-19 11:39:01
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caolichuang

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感受态浓度400ml 菌最后分装10-15管*100ul/管 比较合适吧
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8楼2013-09-19 11:41:23
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
浓度据说是稀释1000倍 OD=0.15  我没测试过，反正最后时间常数5ms以上比较好
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9楼2013-09-20 02:39:23
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刘仁坤2013

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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15879003030: 金币+3 2013-09-22 13:42:25
1 电击杯的准备很重要。把电击杯用蒸馏水冲洗，然后再用75%的乙醇冲洗，电击杯倒置在超净工作台中，紫外灯照射和风吹20分钟左右；把电击杯放到冰盒中，用冰埋至电击杯的塑料处，继续吹半小时。
2 自己制作的电转感受态细胞，一定要用冰冷的去离子水多洗几次，防止电弧的产生。
3 连接产物一定要沉淀，去除里面的离子，防止电弧的产生。量最好在1-2微升之间。
4 不要让电击杯内的溶液产生气泡，加入感受态和连接产物后轻轻的在桌子上磕磕电击杯，防止起泡的产生。
5 整个过程不要太慢。控制在一分钟内。
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10楼2013-09-22 10:57:05
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