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冰凝草

木虫 (小有名气)

[求助] 求助从动物体提取某种特定蛋白的方法

最近老板让我从动物体内提取某种蛋白,我说用活体采样,然后粉碎组织后再用层析或者饱和硫酸铵析出的方法提取总蛋白。但是后续不知道该怎么做。而且老板说我之前的方法也不对。跪求前辈们赐教怎么做这个实验呢,有没有相关的文献可以推荐,不甚感激
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
冰凝草: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-20 09:26:31
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-28 22:48:12
引用回帖:
6楼: Originally posted by 冰凝草 at 2013-09-19 21:33:17
说的和我查到的一些资料很相似,嗯,能提供一些关于层析的方法或者是比较好用的试剂盒么...

Guide to Protein Purification(2nd edition)METHODS IN ENZYMOLOGY Vol-463
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6382232&fpage=1
8楼2013-09-19 22:36:26
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查看全部 11 个回答

同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-17 14:47:18
冰凝草: 金币+2, ★有帮助 2013-09-18 09:20:56
提取样品上清,硫酸铵沉淀,再复溶蛋白,过个疏水柱。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
2楼2013-09-17 14:43:02
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
冰凝草: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-18 09:21:07
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-20 00:22:29
1、查文献,确定蛋白分子量大小、等电点等性质;2、取活体组织,组织捣碎,离心取上清;3、将上清蛋白粗提液进行分级硫酸铵沉淀,确定目的蛋白沉淀的硫酸铵饱和度;3、进行离子交换层析、或者疏水层析,改变层析条件,分析目的蛋白纯度;如果目的蛋白与杂蛋白差别比较大,可以过分子筛凝胶柱。
3楼2013-09-17 15:25:04
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冰凝草

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by shenhaiwang at 2013-09-17 15:25:04
1、查文献,确定蛋白分子量大小、等电点等性质;2、取活体组织,组织捣碎,离心取上清;3、将上清蛋白粗提液进行分级硫酸铵沉淀,确定目的蛋白沉淀的硫酸铵饱和度;3、进行离子交换层析、或者疏水层析,改变层析条件 ...

你好,能具体说下分子量大小和等电点以及那个硫酸铵分级的选择么,还有如果我想保持那个蛋白的活性,是不是用高盐浓度不大好呢。谢谢
4楼2013-09-19 17:06:16
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