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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助从动物体提取某种特定蛋白的方法
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冰凝草

木虫 (小有名气)

[求助] 求助从动物体提取某种特定蛋白的方法

最近老板让我从动物体内提取某种蛋白，我说用活体采样，然后粉碎组织后再用层析或者饱和硫酸铵析出的方法提取总蛋白。但是后续不知道该怎么做。而且老板说我之前的方法也不对。跪求前辈们赐教怎么做这个实验呢，有没有相关的文献可以推荐，不甚感激
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1楼 2013-09-15 16:53:25
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冰凝草

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-09-19 21:05:13
用高浓度的盐溶液变性后的蛋白质一般用透析超滤处理除去盐离子后能够复性，也可以用分子筛层析除去盐，顺便根据分子量进行分离。
从头做分离注意几个问题：
1.查文献或者数据库，确定蛋白分子量大小、等电点等性质 ...

说的和我查到的一些资料很相似，嗯，能提供一些关于层析的方法或者是比较好用的试剂盒么
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6楼2013-09-19 21:33:17
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-17 14:47:18
冰凝草: 金币+2, ★有帮助 2013-09-18 09:20:56
提取样品上清，硫酸铵沉淀，再复溶蛋白，过个疏水柱。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
2楼2013-09-17 14:43:02
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰凝草: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-18 09:21:07
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-20 00:22:29
1、查文献，确定蛋白分子量大小、等电点等性质；2、取活体组织，组织捣碎，离心取上清；3、将上清蛋白粗提液进行分级硫酸铵沉淀，确定目的蛋白沉淀的硫酸铵饱和度；3、进行离子交换层析、或者疏水层析，改变层析条件，分析目的蛋白纯度；如果目的蛋白与杂蛋白差别比较大，可以过分子筛凝胶柱。
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3楼2013-09-17 15:25:04
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冰凝草

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shenhaiwang at 2013-09-17 15:25:04
1、查文献，确定蛋白分子量大小、等电点等性质；2、取活体组织，组织捣碎，离心取上清；3、将上清蛋白粗提液进行分级硫酸铵沉淀，确定目的蛋白沉淀的硫酸铵饱和度；3、进行离子交换层析、或者疏水层析，改变层析条件 ...

你好，能具体说下分子量大小和等电点以及那个硫酸铵分级的选择么，还有如果我想保持那个蛋白的活性，是不是用高盐浓度不大好呢。谢谢
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4楼2013-09-19 17:06:16
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