24小时热门版块排行榜

返回列表

千嶪

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1
帖子: 1
在线: 49分钟
虫号: 2626945
注册: 2013-08-31

[交流] 构建真核表达载体求助引物用不用加起始和终止密码子了~？已有1人参与

构建真核表达载体pSecTag2A 图谱上显示T7后起始密码子ATG 6XHIS后面有TAA终止密码子是不是做引物不用加起始和终止密码子了？还有如果我除了这个载体的图谱还想要这个载体的序列信息怎么得到啊 Invitrogen不让下了不知道为啥多谢多谢

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

双顺反子表达载体的构建——求助！已经有8人回复
原核表达载体目的片段终止密码子后出现ATG 已经有12人回复
蛋白表达不出来，是什么原因造成的已经有7人回复
为什么扩了一个抗性基因，连到载体上，这个基因没有表达呢，跪求各个大牛指导！！！已经有17人回复
请问克隆表达时目的片段前多加了KOZAK序列会影响融合蛋白表达吗？已经有5人回复
原核表达载体蛋白诱导已经有18人回复
目的基因表达载体的构建问题~请指教已经有6人回复
如何设计引物扩增片段？做克隆的已经有11人回复
共表达载体只表达出一个蛋白已经有21人回复
细胞稳定转染，质粒的设计已经有15人回复
添加了 NcoI 酶切位点的基因合成与起始密码子已经有3人回复
【求助/交流】表达载体pCAMBIA1304表达顺序看不懂已经有12人回复
【求助/交流】原核表达，预测的信号肽序列是否包括已经有7人回复
【求助/交流】（引物设计）怎么防止pET28a中Nco1的ATG影响目的基因的表达？已经有9人回复

1楼 2013-09-14 18:17:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

如果你想在C端融合载体上的his-tag，目的基因上的终止密码子要去掉。反之则需要有终止密码子。
至于起始位点，你如果想把目的基因直接克隆到启动子下游的第一个ATG处（一般也有一个酶切位点），常用的做法是直接利用酶切位点处的ATG设计克隆基因时的5'引物，经酶切连接后就可以直接在ATG处开始表达你的目的基因了。当然你也可以选择其他酶切位点克隆，要注意的是载体上从第一个ATG到目的基因的起始要符合阅读框。

赞一下