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千嶪

新虫 (初入文坛)

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[交流] 构建真核表达载体求助引物用不用加起始和终止密码子了~？已有1人参与

构建真核表达载体pSecTag2A 图谱上显示T7后起始密码子ATG 6XHIS后面有TAA终止密码子是不是做引物不用加起始和终止密码子了？还有如果我除了这个载体的图谱还想要这个载体的序列信息怎么得到啊 Invitrogen不让下了不知道为啥多谢多谢

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1楼 2013-09-14 18:17:29

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

如果你想在C端融合载体上的his-tag，目的基因上的终止密码子要去掉。反之则需要有终止密码子。
至于起始位点，你如果想把目的基因直接克隆到启动子下游的第一个ATG处（一般也有一个酶切位点），常用的做法是直接利用酶切位点处的ATG设计克隆基因时的5'引物，经酶切连接后就可以直接在ATG处开始表达你的目的基因了。当然你也可以选择其他酶切位点克隆，要注意的是载体上从第一个ATG到目的基因的起始要符合阅读框。

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