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will-jiang金虫 (初入文坛)
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[求助]
PCR引物设计
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| 求教如何手动设计PCR引物及添加多个酶切位点，并且转入载体中，有什么具体的步骤么？希望各位前辈举例说明，多谢了~~ |
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yimingwang
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1.分析目的基因酶切位点，在载体中选择目的基因中没有的单酶切位点。 2.引物：酶切位点序列+1-3个碱基（用来调整阅读框）+21-24个目的基因特异序列。反向引物注意根据要求，是否需要去掉stop code。 3。跑PCR，产物回收，连入TA载体，并测序。 4。T载体内片断酶切回收。 5。目的载体酶切，回收。 6。带酶切位点的目的片断和切好的目的载体，T4连接，转化。 7。科隆PCR鉴定。 结束。 |
2楼2013-09-12 01:17:08