| 查看: 1261 | 回复: 7 | ||||
[求助]
怎么测膜蛋白
|
| 想测肿瘤细胞膜蛋白的表达，但细胞内也有该蛋白，用哪些方法可以检测？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有116人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 细胞破壁去除蛋白的方法
已经有13人回复
- 蛋白质印迹目的蛋白质量测定
已经有5人回复
- 蛋白质大小的计算
已经有7人回复
- 蛋白质的疏水性、氢键、静电作用力、范德华力可以测定吗？还是只有理论？
已经有10人回复
- 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？
已经有4人回复
- 污泥中的总糖和总蛋白质怎么测定？
已经有13人回复
- 考马斯亮蓝测蛋白，含量怎么计算？
已经有16人回复
- 怎么计算蛋白的等电点，谢谢
已经有14人回复
- 关于质谱测定蛋白质分子量的图谱分析
已经有19人回复
- 测蛋白，标准品的选择，您是怎样选的？
已经有24人回复
- 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦
已经有18人回复
- 求助：测过细胞中总蛋白质含量的同学请进
已经有6人回复
- 蛋白降解（半衰期）的测算
已经有10人回复
- 蛋白质如何测定
已经有12人回复
- 求高手告知：如何测定特定蛋白的浓度，目的蛋白占总蛋白百分比？
已经有5人回复
- 怎么预测蛋白质的核定位信号？没有核定位信号怎样才能进入细胞核呢？
已经有5人回复
- 【求助/交流】求教 如何测定蛋白质的摩尔浓度
已经有12人回复
- 【求助/交流】胶原蛋白的分子量怎么测定呀？急！
已经有13人回复
- 【求助/交流】如何测定蛋白质的分子量大小？
已经有11人回复
- BCA试剂盒的使用方法
已经有3人回复
- 【求助/交流】蛋白浓度测定 BSA法或适宜方法
已经有5人回复
- 【原创】蛋白质快速测定方法步骤
已经有5人回复
- 【求助】考马斯测定蛋白质含量时稀释倍数怎么定
已经有7人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
2楼2013-09-06 12:15:57
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
3楼2013-09-06 12:21:53
4楼2013-09-06 12:24:26
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
5楼2013-09-06 12:26:08
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
6楼2013-09-06 15:13:05
7楼2013-09-06 20:34:21
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
|
首先把细胞膜分离出来，接着在分离膜蛋白就行了。 很多公司有膜蛋白提取试剂盒，用有机溶剂抽提的，不用超速离心，普通的离心机就可以。具体实验方案，可以参考有关细胞生物学实验手册，或者试剂盒说明书。下面以大鼠肝脏中细胞膜的分离举例说明操作步骤。 举例： 大鼠肝脏中细胞膜的分离 一、.试剂：匀浆介质：25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L氯化镁溶液、10mmol/L Tris-HCl,pH=7.4 高密度蔗糖溶液：2.0mol/L蔗糖溶液、1mmol/L氯化镁溶液、10mmol/L Tris-HCl,pH=7.4 向以上两种溶液中加入蛋白酶抑制剂。 二、实验动物：成年雄性大鼠一只 三、器材：低温冷冻离心机、匀浆器、血液尼龙过滤网（孔径750um)、注射器（带金属套管针）、超速离心机。 四、操作步骤： 以下所有实验操作在4度环境下进行。 1.提取麻醉后刚刚处死的大鼠肝脏并称重，然后在冰上烧杯中用剪刀完全剁碎。事先对大鼠麻醉，并对其门静脉灌注20mL匀浆介质。 2.用剁碎物在匀浆介质中混匀（大约4mL/g肝脏）。 3.用匀浆器对于剁碎物进行匀浆。 5.用血液尼龙过滤网去除未被粉碎的细胞和结缔组织，并用玻璃棒搅拌以利于过滤。 6.用浓度为5mL/g的匀浆介质来稀释滤液，分装于两个50mL的离心管中，在280g下离心10分钟。 7.用浓度为粉碎细胞后分离离心细胞成分，匀浆，即可分离出细胞膜。 8.用注射器和金属套管针吸取上清液。 9.在280g下离心获得的上清液在1500g下离心10分钟；缓慢倒掉上清液。 10.再使用匀浆器对1500g下离心10分钟得到的沉淀物放入25mL的匀浆介质中重悬，与2倍前面液体的体积的高密度蔗糖溶液混匀。 11.用Beckman（或者其他品牌）的离心机在113000g离心1小时，如果样品体积不够离心管的装液标准，则用匀浆介质加以补充。 12.用注射器和金属套管针吸取在界面上呈带状分布的细胞膜片段。 13.用匀浆介质将12得到的混悬液适当稀释后（离心管的装液标准），在离心机上用3000g离心10分钟以收集细胞膜。 |
8楼2013-09-06 23:23:43
