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godnoi

金虫 (小有名气)

[求助] 求高手告知:如何测定特定蛋白的浓度,目的蛋白占总蛋白百分比?

各位大侠,本人现在做的课题是一个蛋白的酵母表达,目前蛋白已经表达出来了,但不知如何测定目的蛋白浓度。我的蛋白大小为15KD,没有标签,不能纯化。听说可以直接测目的蛋白占总蛋白的百分比,但不知具体怎么操作。特在此求教,不甚感激!
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l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-23 12:38:17
godnoi(金币+1): 有帮助 2011-12-22 10:20:29
godnoi(金币+1): 有帮助 2012-02-28 18:13:09
古老的方法是进行估算,借助电泳图像。总蛋白容易得到,上样量也知道,可以估算,通过一个已知蛋白做对照。若是有钱可以买抗体,用磁珠分离目的蛋白,就可以确定了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2011-09-22 23:13:53
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1514132

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-23 12:38:26
跑蛋白样品的SDS-PAGE电泳,留取凝胶做蛋白薄层扫描,就可以得到目的蛋白占菌体总蛋白的百分含量。
3楼2011-09-23 07:49:22
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casey200788

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酵母表达的蛋白杂蛋白很少的。如果不是很精确的要求,一般SDS-PAGE估算,借助电泳图像。总蛋白容易得到,上样量也知道,可以与蛋白质MARKER一起估算,或像楼上说的,薄层扫描也可以。
4楼2011-12-10 17:17:29
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xinlv

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
SDS-PAGE电泳图像直接测目的蛋白占总蛋白的百分比
酵母表达的蛋白杂蛋白很少的,如要精确,可过分子筛层析柱,按峰图确定
5楼2012-02-28 17:41:43
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yesexue

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by casey200788 at 2011-12-10 17:17:29
酵母表达的蛋白杂蛋白很少的。如果不是很精确的要求,一般SDS-PAGE估算,借助电泳图像。总蛋白容易得到,上样量也知道,可以与蛋白质MARKER一起估算,或像楼上说的,薄层扫描也可以。

请问一下薄层扫描需要什么仪器啊
6楼2013-08-15 10:38:49
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