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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求高手告知：如何测定特定蛋白的浓度，目的蛋白占总蛋白百分比？
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godnoi

金虫 (小有名气)

[求助] 求高手告知：如何测定特定蛋白的浓度，目的蛋白占总蛋白百分比？

各位大侠，本人现在做的课题是一个蛋白的酵母表达，目前蛋白已经表达出来了，但不知如何测定目的蛋白浓度。我的蛋白大小为15KD，没有标签，不能纯化。听说可以直接测目的蛋白占总蛋白的百分比，但不知具体怎么操作。特在此求教，不甚感激！
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1楼 2011-09-22 20:21:45
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casey200788

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酵母表达的蛋白杂蛋白很少的。如果不是很精确的要求，一般SDS-PAGE估算，借助电泳图像。总蛋白容易得到，上样量也知道，可以与蛋白质MARKER一起估算，或像楼上说的，薄层扫描也可以。
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4楼2011-12-10 17:17:29
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l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-23 12:38:17
godnoi(金币+1): ★有帮助 2011-12-22 10:20:29
godnoi(金币+1): ★有帮助 2012-02-28 18:13:09
古老的方法是进行估算，借助电泳图像。总蛋白容易得到，上样量也知道，可以估算，通过一个已知蛋白做对照。若是有钱可以买抗体，用磁珠分离目的蛋白，就可以确定了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2011-09-22 23:13:53
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1514132

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-23 12:38:26
跑蛋白样品的SDS-PAGE电泳，留取凝胶做蛋白薄层扫描，就可以得到目的蛋白占菌体总蛋白的百分含量。
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3楼2011-09-23 07:49:22
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xinlv

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
SDS-PAGE电泳图像直接测目的蛋白占总蛋白的百分比
酵母表达的蛋白杂蛋白很少的，如要精确，可过分子筛层析柱，按峰图确定
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5楼2012-02-28 17:41:43
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